[发明专利]颐和春制剂中人参皂苷Rg1、Re、Rb1含量测定方法

说明书

本发明提供了颐和春制剂中人参皂苷Rg1、Re、Rb1含量测定方法，以人参皂苷Rg1、Re、Rb1对照品为对照，以乙腈为流动相A、水为流动相B，采用梯度和等度洗脱相结合的高效液相色谱法测定颐和春制剂中人参皂苷Rg1、Re、Rb1含量。该方法分离效果好，检测灵敏度高，稳定性好，可以精确测定颐和春制剂中人参皂苷Rg₁，Re，Rb₁的含量，能够全面、客观地体现和评价颐和春制剂质量，具有精密度高、稳定性好、重现性好、线性好、回收率高等特点，可有效提高颐和春制剂的质量控制标准，确保其临床疗效。

技术领域

本发明属于中药检测技术领域，涉及一种使用高效液相色谱法测定颐和春制剂中人参皂苷Rg1、Re、Rb1含量测定方法。

背景技术

颐和春制剂，由人参、川牛膝、狗肾、熟地黄、鹿茸、淫羊藿、韭菜子、蛇床子、锁阳等15味药材组成，主要用于补肾壮阳，用于肾阳虚引起的阳痿、遗精、腰膝酸软，其疗效显著、副作用小、使用方便。其中，人参为君药，其有效成分为人参皂苷Rg₁，Re，Rb₁，为了保证颐和春制剂的药品质量，需对制剂中人参皂苷Rg₁，Re，Rb₁含量进行测定，以确保有效成分含量稳定均一。

高效液相色谱(HPLC)具有灵敏度高、准确度高等优点，已成为控制中药质量的重要手段之一，其基本模式为等度和梯度洗脱，将这两种模式组合应用，可将成分较好分离开。现有技术中常采用高效液相色谱法测定含人参中药制剂中人参皂苷Rg₁，Re，Rb₁的含量，例如专利CN102435697A、CN104807905A等公开了采用HPLC等度和梯度结合方式进行检测中药制剂中人参皂苷Rg₁，Re，Rb₁的含量检测。但由于颐和春制剂由15种中药组成，其组分比较复杂(样品预处理极其重要)，多于其他中药制剂组分；同时等度和梯度洗脱的组合方式难以计数，且梯度洗脱的分离机理比较复杂，现有文献披露的实验方案无法满足颐和春制剂中人参皂苷Rg₁，Re，Rb₁的分离和含量检测。

本发明主要对颐和春制剂的预处理及HPLC分析条件进行研究，开发出一种可将颐和春制剂中人参皂苷Rg1、Re、Rb1完全分离的分析方法。

发明内容

发明目的：本发明的目的是提供一种颐和春制剂中相关物质的含量检测方法，

技术方案：本发明提供了颐和春制剂中人参皂苷Rg1、Re、Rb1含量测定方法，以人参皂苷Rg1、Re、Rb1对照品为对照，以乙腈为流动相A、水为流动相B，采用梯度和等度洗脱相结合的高效液相色谱法测定颐和春制剂中人参皂苷Rg1、Re、Rb1含量。

优选地，所述颐和春制剂中人参皂苷Rg1、Re、Rb1含量测定方法包括以下步骤：

(1)对照品制备：精密称取人参皂苷Rg₁对照品、人参皂苷Re对照品及人参皂苷Rb₁对照品，加甲醇溶解制成每1ml含Rg1、Re、Rb1分别为0.05mg、0.25mg、0.60mg的混合溶液，摇匀，即得；

(2)供试品溶液制备：取颐和春制剂，精密称定并置于锥形瓶中，加入醇类溶剂超声、离心，取上清液，残渣加入醇类溶剂超声、离心，合并上清液；将上清液减压浓缩；残渣加水溶解，乙醚萃取；弃去乙醚层，水层中加入水饱和的正丁醇萃取；正丁醇层依次用氢氧化钠水溶液和正丁醇饱和的水洗涤，正丁醇层蒸干，残渣加甲醇溶解并定容，摇匀，即得；

(3)人参皂苷Rg1、Re、Rb1含量测定：分别精密吸取供试品溶液与对照品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，测定；色谱条件为：

填充剂：十八烷基硅烷健合硅胶；

色谱柱：Waters Symmetry C18 250mm×4.6mm，5um；