[发明专利]一种Ⅰ群4型禽腺病毒DNA疫苗及其应用

权利要求书

1.一种Ⅰ群4型禽腺病毒DNA疫苗，其特征在于该疫苗的抗原含有Ⅰ群4型禽腺病毒纤维蛋白C-末端的表达基因。

2.根据权利要求1所述的一种Ⅰ群4型禽腺病毒DNA疫苗，其特征在于所述Ⅰ群4型禽腺病毒纤维蛋白C-末端的表达基因是在其天然表达基因基础上以鸡偏嗜密码子替换其中的鸡稀有密码子所得的产物。

3.根据权利要求1所述的一种Ⅰ群4型禽腺病毒DNA疫苗，其特征在于所述Ⅰ群4型禽腺病毒纤维蛋白C-末端的表达基因是序列如SEQ ID No.2所示的DNA。

4.根据权利要求1所述的一种Ⅰ群4型禽腺病毒DNA疫苗，其特征在于所述抗原是通过以下方法制备的：

1)分别以SEQ ID No.3、SEQ ID No.4所示的DNA片段为引物，以FAV-4病毒为模板，按照94℃变性45s，56℃退火45s，72℃延伸1min，共进行30循环进行PCR扩增；将PCR产物直接克隆到pMD-18T载体上，即得到重组载体pMD-18T-FAV4C；

2)将FAV-4-C基因的核苷酸序列优化至SEQ ID No.2所示状态，合成该基因到pMD-18T载体上，即得到重组载体pMD-18T-optiFAV4C；

3)将重组载体pMD-18T-optiFAV4C与pCAGGS用EcoR I和Sma I双酶切，酶切产物进行1％琼脂糖凝胶电泳，分别回收目的片段和pCAGGS，然后16℃连接过夜，将连接产物在宿主细胞中扩增。

5.根据权利要求4所述的一种Ⅰ群4型禽腺病毒DNA疫苗，其特征在于所述将连接产物在宿主细胞中扩增，具体包括以下操作：将连接产物转化到E.coliDH5α感受态细胞，挑取单菌落接种到2ml含100μg/mL氨苄青霉素的LB培养基，37℃振荡培养12h，提取质粒后用双酶切进行鉴定，即得到作为抗原的重组质粒pCAGoptiFAV4C。

6.根据权利要求5所述的一种Ⅰ群4型禽腺病毒DNA疫苗，其特征在于步骤3)完成后继续执行以下步骤4)：使用商品名为Endofree的质粒大提试剂盒对重组质粒pCAGoptiFAV4C进行提取纯化。

7.一种权利要求1所述疫苗用于预防鸡心包积水肝炎综合征的应用。