[发明专利]一种小叶榕干浸膏指纹图谱质量控制方法

权利要求书

1.一种小叶榕干浸膏指纹图谱质量控制方法，其特征在于：

包括高效液相色谱仪进行梯度洗脱，然后通过质谱进行测定；高效液相色谱条件为：

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填料；

检测波长：280nm；

流动相：流动相A为0.1％甲酸溶液，流动相B为甲醇，采用梯度洗脱，流动相比例均为体积百分比体积，洗脱程序如下：

0-6min，流动相A为95％→90％，流动相B为5％→10％；

6-10min，流动相A为90％→86％，流动相B为10％→14％；

10-18min，流动相A为86％→70％，流动相B为14％→30％；

18-25min，流动相A为70％→50％，流动相B为30％→50％；

25-29min，流动相A为50％→0％，流动相B为50％→100％；

29-32min，流动相A为0％，流动相B为100％；

质谱测定条件包括

采用UPLC-QQQMS，接有电喷雾离子源，负离子化模式；

喷雾电压45psi；

干燥气体氮气；干燥气流量11L/min；干燥气体温度350℃；

毛细管电压：负离子3.5kV；

扫描范围：m/z50-1000；

采用选择离子监控模式优化待测化合物电压，子离子扫描模式：优化子离子、定性离子及二者碰撞能量，多反应监测模式优化各组分分离洗脱条件，最后采用动态多反应监测模式高选择性地分析测定各组分,具体质谱条件优化为：

2.如权利要求1所述的小叶榕干浸膏指纹图谱质量控制方法，还包括供试品溶液的制备，其特征在于，所述的供试品溶液的制备方法包括以下步骤：

取小叶榕干浸膏提取物，加入10％乙腈，超声提取，摇匀，微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。

3.如权利要求2所述的小叶榕干浸膏指纹图谱质量控制方法，其特征在于，所述超声功率为250W，频率为30-50kHz，超声时间为30-60min。

4.如权利要求1所述的小叶榕干浸膏指纹图谱质量控制方法，还包括对照品溶液的制备，其特征在于，所述的对照品溶液制备方法包括以下步骤：

分别精密称取没食子酸、原儿茶酸、5-二咖啡酰奎宁酸、儿茶素、咖啡酸、绿原酸、表儿茶酸、荭草素、牡荆素、异荭草素、芦丁对照品，置于量瓶中，用70％甲醇定容，配成混标溶液，备用。

5.如权利要求2所述的小叶榕干浸膏指纹图谱质量控制方法，其特征在于：还包括标准指纹图谱的建立方法,包括以下步骤：

取10批小叶榕干浸膏，配置成供试品溶液，将这10批供试品溶液经过HPLC-MS测定，获得10批样品的MRM图，将其中异牡荆素峰设为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积，以此获得以18个共有峰形成的指纹图谱。

6.如权利要求5所述的小叶榕干浸膏指纹图谱质量控制方法，其特征在于：所述18个共有峰的峰面积之和占所有峰面积之和大于90％。

7.如权利要求1所述的小叶榕干浸膏指纹图谱质量控制方法，其特征在于：高效液相梯度洗脱时，流速为0.3-0.6ml/min，柱温为20-30℃。

8.如权利要求1所述的小叶榕干浸膏指纹图谱质量控制方法，其特征在于：所述方法包括以下内容：

(1)供试品溶液的制备：

取小叶榕干浸膏提取物，加入10％乙腈，超声提取，摇匀，微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液；

(2)对照品溶液制备：

分别精密称取没食子酸、原儿茶酸、5-二咖啡酰奎宁酸、儿茶素、咖啡酸、绿原酸、表儿茶酸、荭草素、牡荆素、异荭草素、芦丁对照品，置于1000ml量瓶中，用70％甲醇定容，配成混标溶液，备用；

(3)色谱条件：

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填料；

检测波长：280nm；

流动相：流动相A为0.1％甲酸溶液，流动相B为甲醇，采用梯度洗脱，流动相比例均为体积百分比体积，洗脱程序如下：

0-6min，流动相A为95％→90％，流动相B为5％→10％；

6-10min，流动相A为90％→86％，流动相B为10％→14％；

10-18min，流动相A为86％→70％，流动相B为14％→30％；

18-25min，流动相A为70％→50％，流动相B为30％→50％；

25-29min，流动相A为50％→0％，流动相B为50％→100％；

29-32min，流动相A为0％，流动相B为100％；

(4)质谱条件：

采用UPLC-QQQMS，接有电喷雾离子源，负离子化模式；

喷雾电压45psi；

干燥气体氮气；干燥气流量11L/min；干燥气体温度350℃；

毛细管电压：负离子3.5kV；

扫描范围：m/z50-1000；

(5)标准指纹图谱的建立：以上述方法作为建立小叶榕干浸膏的指纹图谱的测试手段，取10批小叶榕干浸膏，配置成供试品溶液，将这10批供试品溶液经过HPLC-MS测定，获得10批样品的MRM图，将其中异牡荆素峰设为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积，以此获得以18个共有峰形成的指纹图谱；所述18个共有峰的峰面积之和占所有峰面积之和大于90％；

(6)以(1)-(4)方法作为待测小叶榕干浸膏的指纹图谱的测试手段，制备待测样品的指纹图谱；

(7)将待测小叶榕干浸膏的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，相似度大于0.9。