[发明专利]一种脐带间充质干细胞无血清培养基及其制备方法和用途

说明书

本发明提供了一种脐带间充质干细胞无血清培养基，其特征在于：包括DMEM低糖培养基，还包括转铁蛋白、血清白蛋白、胰岛素、血小板衍生生长因子、表皮生长因子、转化生长因子、β‑巯基乙醇、二氢杨梅素和儿茶素。本发明属于干细胞培养技术领域，本发明提供的脐带间充质干细胞无血清培养基可显著提高脐带间充质干细胞的贴壁性能和增殖速率，利于脐带间充质干细胞的增殖和干细胞特性保持，成脂和成骨诱导分化潜能佳，培养基的成分较简单，成本较低。

技术领域

本发明属于干细胞培养技术领域，具体涉及一种脐带间充质干细胞的无血清培养液及其制备方法和用途。

背景技术

人脐带间充质干细胞(human umbilical cordmesenchymal stem cells，hUCMSCs)来源于脐带华尔氏通胶，可在不同生长因子的调节下分化成来源于3个胚层的不同组织细胞类型。人脐带间充质干细胞具有取材方便，来源广泛，无伦理学限制等优势，不表达主要组织相容性II类抗原，微量表达主要组织相容性I类抗原，免疫原性低，移植排斥作用小，而且具有免疫调节功效，移植后的人脐带间充质干细胞分泌的营养因子，具有促血管生成、促细胞生长、抗炎症和抗纤维化等作用。作为目前临床干细胞中应用较广泛的干细胞，人脐带间充质干细胞已开展了多种类型疾病的临床应用研究。

传统的人脐带间充质干细胞培养基，添加动物血清以供应细胞生长所需的营养物质，但会给干细胞的生产与科研带来多种不利因素，如：批间差异较大，来源不稳定，需要大量验证工作，价格昂贵，成分不明确，不利于疫苗和单克隆抗体等目的产品的分离纯化，容易被病毒和支原体感染等。无血清培养基是在基础培养基的基础上，加入成分明确的血清替代成分，以满足干细胞的培养要求，同时避免因使用血清带来的诸多不利因素。血清替代成分较复杂，包括生长因子、蛋白等营养成分。无血清培养基是人脐带间充质干细胞走向临床应用的重要条件，也是近年来的研究热点之一。

中国专利申请CN 105420182公开了一种无血清的脐带间充质干细胞培养基，包括DMEM培养基、碱性成纤维生长因子、表皮生长因子、胰岛素、白血病抑制因子、L-谷氨酰胺、2-巯基乙醇、亚硒酸钠和纤连蛋白等，通过添加较高含量的纤连蛋白实现了较好的贴壁性能，但细胞增殖速率较慢。

中国专利申请CN 104877963公开了一种无血清的人脐带间充质干细胞培养基，包括IMDM基础培养基，还包括如下组分：重组人胰岛素、重组转铁蛋白、维生素C、人血清白蛋白、成纤维细胞生长因子、血小板衍生生长因子、表皮生长因子、胰岛素样生长因子、转化生长因子、纤维连接蛋白、胎球蛋白和β细胞素，通过添加纤维连结蛋白和胎球蛋白增强了人脐带间充质干细胞的贴壁性能，通过添加β细胞素维持人脐带间充质干细胞的干细胞特性，组分较复杂，成本较昂贵。

目前已有一些市售脐带间充质干细胞无血清培养基，如Gibco、赛业生物科技等公司的脐带间充质干细胞无血清培养基，但存在价格昂贵、贴壁性能不够理想等缺点，贴壁性能不佳会对脐带间充质干细胞的增殖、分化等一系列反应产生影响。因此，提供一种成分较简单、贴壁性能优良的无血清培养基以促进脐带间充质干细胞的增殖具有重要意义。

发明内容

为解决现有技术存在的问题，本发明提供了一种脐带间充质干细胞无血清培养基，通过添加少量的二氢杨梅素和儿茶素，可显著提高脐带间充质干细胞的贴壁性能和增殖速率，利于脐带间充质干细胞的增殖和干细胞特性保持，培养基的成分较简单，成本较低。

本发明的目的将通过下面的详细描述来进一步说明。

本发明提供一种脐带间充质干细胞无血清培养基，包括DMEM低糖培养基，还包括转铁蛋白、血清白蛋白、胰岛素、血小板衍生生长因子、表皮生长因子、转化生长因子、β-巯基乙醇、二氢杨梅素和儿茶素。