[发明专利]D-果糖-6-磷酸醛缩酶A突变体、重组表达载体、基因工程菌及其应用和反应产物有效
| 申请号： | 201611192703.4 | 申请日： | 2016-12-21 |
| 公开（公告）号： | CN106701723B | 公开（公告）日： | 2019-09-06 |
| 发明（设计）人： | 于洪巍;杨小红 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12N9/88 | 分类号： | C12N9/88;C12P7/26;C12P17/12 |
| 代理公司： | 杭州裕阳联合专利代理有限公司 33289 | 代理人： | 姚宇吉 |
| 地址： | 310000 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基因工程菌 突变体 重组表达载体 肉桂醛 羟醛缩合反应 不对称催化 高光学纯度 核苷酸序列 突变体蛋白 突变体基因 硝基肉桂醛 催化活性 手性产物 手性砌块 医药领域 羟基丙酮 醛缩酶 磷酸 制备 甲醛 应用 | ||
1.一种D-果糖-6-磷酸醛缩酶A突变体，其特征在于：所述突变体是在SEQ ID No.2所示的氨基酸序列上第59位点谷氨酰胺进行不同的取代；
所述D-果糖-6-磷酸醛缩酶A突变体的氨基酸序列选自下列突变序列:
SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列，第59位突变为亮氨酸；
SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，第59位突变为苏氨酸。
2.根据权利要求1所述的D-果糖-6-磷酸醛缩酶A突变体，其特征在于，编码所述的D-果糖-6-磷酸醛缩酶A突变体的核苷酸序列选自下列序列：
SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列；
SEQ ID NO:5所示的核苷酸序列。
3.重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体包含编码权利要求1所述的氨基酸序列的核苷酸序列。
4.基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌由权利要求3所述的重组表达载体转化至宿主微生物中获得。
5.根据权利要求4所述的基因工程菌，其特征在于，所述宿主微生物为大肠杆菌。
6.D-果糖-6-磷酸醛缩酶A突变体的制备方法，其特征在于，培养权利要求5所述的基因工程菌，诱导获得D-果糖-6-磷酸醛缩酶A重组蛋白。
7.如权利要求1所述的D-果糖-6-磷酸醛缩酶A突变体或如权利要求4所述的基因工程菌在不对称催化肉桂醛、α-溴肉桂醛、4-硝基肉桂醛、吡啶-2-甲醛中任意一种和羟基丙酮的羟醛缩合反应以制备光学活性产物中的应用。
8.根据权利要求7所述应用，其特征在于，肉桂醛、α-溴肉桂醛、4-硝基肉桂醛、吡啶-2-甲醛中任意一种和羟基丙酮为底物，所述D-果糖-6-磷酸醛缩酶A突变体或基因工程菌为催化剂，进行反应，其中醛底物初始浓度为10～500mmol/L，羟基丙酮初始浓度为50～2500mmol/L。
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