[发明专利]一种酪蛋白磷酸肽的标签肽及其应用

权利要求书

1.一种酪蛋白磷酸肽的标签肽在奶制品中酪蛋白磷酸肽含量检测中的应用，所述标签肽的氨基酸序列为LSQSKVLPVPQK。

2.一种检测奶制品中酪蛋白磷酸肽含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)如果待测样品为固体，先用水溶解，如果待测样品为液体则直接使用，然后加入内标肽；

(2)使用高效液相色谱-质谱联用对样品进行检测；

(3)计算待测样品中，酪蛋白磷酸肽的标签肽与对应的内标肽的峰面积比，其中标签肽氨基酸序列为LSQSKVLPVPQK，对应的内标肽氨基酸序列为LSQSKVL*PV*PQK，其中L*和V*为碳氮全同位素标记的氨基酸残基；

(4)将待测样品中所述的标签肽的峰面积比数据代入标准曲线中，计算出所述标签肽的浓度，然后根据相应的转换公式计算出待测样品中酪蛋白磷酸肽的含量，

所述待测样品经过前处理，所述前处理方法为：使用pH为4.6的乙酸铵溶液进行蛋白沉淀，

所述标准曲线由以下方法获得：

将所述的标签肽稀释不同浓度梯度作为标准品，然后加入内标肽，再经高效液相色谱-质谱联用检测，由标签肽的含量与标签肽、内标肽检测峰面积比值获得标准曲线，其中，样品检测与标准曲线制备时高效液相色谱和质谱的检测条件相同。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述高效液相色谱使用BEH300 C18色谱柱，柱温为35℃，流动相为0.1％甲酸乙腈和0.1％甲酸水溶液，流速为0.3mL/min。

4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述质谱使用的毛细管电压为3.5kV，脱溶剂温度375℃，脱溶剂气流量11.5L/min，所述的标签肽的母离子为442.1m/z，子离子372.4m/z对应的碰撞能量为10eV，子离子568.5m/z对应的碰撞能量为10eV；内标物特征母离子为446.3m/z，子离子372.2m/z，对应的碰撞能量为15eV，子离子574.5m/z，对应的碰撞能量为10eV。