[发明专利]一种酪蛋白磷酸肽的标签肽及其应用

说明书

本发明公开了一种酪蛋白磷酸肽的标签肽，氨基酸序列为LSQSKVLPVPQK。本发明同时还公开了一种酪蛋白磷酸肽的内标肽，氨基酸序列为LSQSKVL*PV*PQK，其中L*和V*为碳氮全同位素标记的氨基酸残基。本发明通过选择酪蛋白磷酸肽中的一种特征肽作为检测目标来对奶制品中酪蛋白磷酸肽进行定量检测，该特征肽为经过筛选最终确定的，为酪蛋白磷酸肽中最具代表性的一种多肽，在酪蛋白磷酸肽原料中含量相对稳定，再加入经同位素标记的内标肽来对结果进行校正，该方法具有较好的线性、回收率高、准确性好。

技术领域

本发明属于食品检测技术领域，特别是涉及一种酪蛋白磷酸肽的标签肽及其应用。

背景技术

酪蛋白磷酸肽(Casein Phosphopeptides)(以下简称：CPPs)是经单一酶或复合酶系水解牛酪蛋白后产物分布于α_s1、α_s2、β以及κ酪蛋白中的不同区域。它可以用于各种营养、保健食品中，能有效提高人体对钙、铁、锌等二价矿物质的摄入量以及吸收和利用率。市场上出现了大量添加CPPs的婴幼儿配方奶粉，由于不同加工工艺等原因造成产品质量良莠不齐，但又没有建立准确有效的评价检测方法。

目前普遍采用乙醇沉淀法、电泳法、高效液相色谱法、高效液相色谱-质谱联用法测定酪蛋白磷酸肽。

授权公告号为CN103792298B的中国发明专利公开了一种乳制品中酪蛋白磷酸肽含量的检测方法，该方法主要包括以下步骤：采用BaCl₂-乙醇法对酪蛋白磷酸肽原料进行纯化；采用高效液相色谱法对纯化后的酪蛋白磷酸肽原料进行标准曲线的绘制；采用固相萃取对乳制品样品进行纯化后，用高效液相色谱法对其进行检测，得到检测结果。乙醇沉淀法既可分离磷酸肽，也适用于CPPs原料的含量测定，但是，此方法灵敏度低且特异性差，不适用于添加CPPs的食品及保健品的测定。

申请号为201010134407.5的中国发明专利公开了一种检测牛乳制品中酪蛋白磷酸肽含量的方法，使用了高压毛细管电泳分析仪作为检测设备。上述方法包括制备酪蛋白磷酸肽标准溶液以生成酪蛋白磷酸肽含量与高压毛细管电泳分析仪获得的分析图谱积分值之间的标准曲线、对待测牛乳制品进行检测、根据待测牛乳制品的检测结果利用标准曲线获得待测牛乳制品的酪蛋白磷酸肽含量。电泳法，重现性且易受样品中蛋白质和其它非目标多肽的干扰，不适合检测复杂食品基质中CPPs的含量。

授权公告号为CN103760246B的中国发明专利公开了一种牛奶中酪蛋白磷酸肽液相检测方法，步骤包括：将待检牛奶加入酪蛋白磷酸肽制成10～100ppm的酪蛋白磷酸肽分散溶液，脱蛋白后过阳离子交换树脂柱脱钙，将脱钙后所得洗脱液过阳离子交换树脂柱，除杂和富集，将收集液在温度60～70℃，转速为50～60rpm下真空旋转蒸发，过膜后作为液相检测样品；然后进行液相检测，按外标法以峰面积法计算牛奶中添加酪蛋白磷酸肽的浓度。高效液相色谱法分离效能高但是灵敏度较低。乳制品是富含蛋白质和多肽的复杂基质样品，且酪蛋白磷酸肽是一系列分子量分布不等的多肽混合物，在紫外或荧光检测器下难以找到不受干扰的特征峰，无法实现准确有效的定量检测分析。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种用于检测奶制品中酪蛋白磷酸肽的标签肽。使用该标签肽以及相应的经同位素标记的内标肽，利用高效液相色谱-质谱联用技术可准确测定样品中的酪蛋白磷酸肽的含量。

一种酪蛋白磷酸肽的标签肽，氨基酸序列为LSQSKVLPVPQK。

一种酪蛋白磷酸肽的内标肽，氨基酸序列为LSQSKVL*PV*PQK，其中L*和V*为碳氮全同位素标记的氨基酸残基。使用时，可以通过向样品中添加内标肽，可以达到对检测结果进行校正的目的。

本发明又提供了所述的标签肽在奶制品中酪蛋白磷酸肽含量检测中的应用。

优选的，所述奶制品为婴幼儿配方奶粉。