[发明专利]一种吡咯咪唑聚酰胺脂质体及其制备方法及其用途

说明书

本发明提供了一种吡咯咪唑聚酰胺脂质体及其制备方法及其用途，具体公开了一种吡咯咪唑聚酰胺脂质体，其由脂质双分子层和包载于脂质双分子层内的吡咯咪唑聚酰胺构成，其中脂质双分子层包括磷脂分子和胆固醇，其中，磷脂分子和胆固醇的摩尔比为(3～4):1，磷脂分子与吡咯咪唑聚酰胺的摩尔比为(20～30):1。本发明的吡咯咪唑聚酰胺脂质体以脂质体内部空腔包载吡咯咪唑聚酰胺，相比于其他载体的包载方式能够有效提高包载量，从而显著提高吡咯咪唑聚酰胺类药物的生物利用度。

技术领域

本发明涉及药物制剂领域，具体涉及一种吡咯咪唑聚酰胺脂质体及其制备方法。

背景技术

以基因为靶点的癌症治疗是一种新兴、高效的治疗手段，开发小分子化合物抑制类药物用于肿瘤治疗显得尤为关键。吡咯咪唑聚酰胺为一类人工合成的主要由五元杂环化合物N-甲基吡咯(Py)、N-甲基咪唑(Im)和N-甲基-3-羟基吡咯(Hp)芳香氨基酸组成的，经酰胺键连接的人工小分子配体。吡咯-咪唑类聚酰胺通过与DNA碱基对之间最大可能地形成氢键来识别DNA序列：反向平行成对的Py/Py识别T·A或A·T碱基对；Im/Py特异性识别G·C碱基对，而Py/Im特异性识别C·G碱基对，Hp/Py特异性识别T·A碱基对，Py/Hp特异性识别A·T碱基对。通过设计特定的与靶向基因启动子关键序列特异结合的吡咯-咪唑类聚酰胺，可以阻断转录调控蛋白与靶向基因启动子的结合，从而从基因转录水平阻断基因的表达。与目前真核细胞中广泛使用的shRNAi技术相比，吡咯-咪唑类聚酰胺介导的基因功能抑制在具备高特异性的同时，还具有稳定性高和细胞通透性好等显著优点，因此在以抑制基因表达为目的的药物研发中具有重大潜力。但该类小分子药物(如聚酰胺类)通常存在溶解性差，血液半衰期短，生物利用率低等缺点，需要通过制剂技术改进药物的代谢和动力学参数。

脂质体是类脂双分子层形成的超微型球体，类似生物膜结构，具有单一或几个环状脂质双分子层的壳层，同时内部含有一个水相的空腔，可以同时包载亲水性药物及疏水性药物。其基本组分磷脂是生物体内固有的成分，在生物体内经生物转化而降解，无毒性及免疫原性，因此，脂质体被认为是最具发展前途的药物载体之一。

目前，Dervan、Sugiyama及Fukuda等课题组制备了一系列吡咯-咪唑类聚酰胺及其衍生物，也深入研究了其在体内外对基因表达的影响，近年来取得了令人瞩目的成果。但吡咯-咪唑类聚酰胺要发挥对目标基因表达的调控作用，能否穿过细胞膜和核膜进入细胞核是关键的一步。然而吡咯-咪唑类聚酰胺在不同细胞中的穿膜能力存在较大的差异，在部分组织中穿膜能力有限，尤其是在实体瘤中难以穿透癌细胞的细胞膜和核膜作用于目标DNA序列。另外，吡咯咪唑聚酰胺还存在生物体内溶解性差，易团聚结晶，导致利用度低，生物用量大的问题。Peter B.Dervan组通过加入羟丙基β环糊精来增加吡咯-咪唑类聚酰胺的水溶性，可实现裸鼠的静脉给药。然而，羟丙基β环糊精具有圆筒状疏水性内腔和亲水性外沿，导致吡咯咪唑聚酰胺的包载率很低。而羟丙基β环糊精本身的水溶性有限，易产生溶血性和刺激性。

发明内容

基于脂质体作为载体的优异性能，本发明的目的是采用以脂质体为基质的纳米药物载体对吡咯-咪唑聚酰胺进行有效包载，利用肿瘤生长的特点，血管增生导致的大量有缺陷的滋养血管生成及不完善的淋巴回流系统，促成纳米颗粒通过增强渗透及滞留效应对肿瘤实现被动性的靶向效果。具有长循环能力的纳米药物输送载体能够最终从脉管中溢出，累积到肿瘤组织，进入细胞内释放出治疗药物而起作用。

本发明旨在通过合理设计，从抑制剂化学合成入手，实现其高特异性地DNA结合能力以及优良的穿膜性能；应用纳米材料包裹和靶向运输机制，显著改善聚酰胺类药物的药效以及毒理特征，以改善药物临床应用前景。实现药物在肿瘤组织内的高效蓄集，是设计药物递送体系的关键所在。为实现这一目的，以类似生物膜结构的脂质体材料对吡咯咪唑聚酰胺进行包载显著提高药物的溶解度并改变药物的运输方式，以低免疫原性包覆材料(如长链聚乙二醇)表面修饰策略提高药物载体的生物相容性及胶体稳定，延长其血液循环时间，有助于其通过EPR效应被动富集于肿瘤组织。