[发明专利]一种重组融合碱性磷酸酶-过敏原蛋白及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种重组融合碱性磷酸酶-过敏原蛋白的表达载体，所述表达载体由一种含表达所述碱性磷酸酶的序列和表达所述过敏原蛋白的DNA分子有功能地连接组成，其特征在于，

所述表达所述碱性磷酸酶的序列为pcmv-signal peptide-seap-linker-MCS-HA或pcmv-signal peptide-MCS-linker-seap-HA，所述linker为1-250个氨基酸。

2.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述过敏原蛋白包括虾原肌球蛋白、蟹原肌球蛋白、蟹精氨酸激酶、鸡蛋卵类黏蛋白Gal d1、鸡蛋卵清蛋白Gal d2、鸡蛋卵转铁蛋白Gal d3、鸡蛋溶菌酶Gal d4；牛奶β-乳球蛋白、牛奶α-乳白蛋白、牛奶酪蛋白；德国蟑螂Blag1～8、屋尘螨Derp1～2；粉尘螨Derf1～2；猫毛Feld1、狗毛Canf1或豚草中的致敏蛋白，或与所述过敏原蛋白共享抗体表位的变体或片段；所述过敏原的基因通过人工合成获得。

3.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述过敏原蛋白包括虾原肌球蛋白、蟹原肌球蛋白、蟹精氨酸激酶、鸡蛋卵类黏蛋白Gal d1、鸡蛋卵清蛋白Gal d2、鸡蛋卵转铁蛋白Gal d3、鸡蛋溶菌酶Gal d4；牛奶β-乳球蛋白、牛奶α-乳白蛋白、牛奶酪蛋白；德国蟑螂Blag1～8、屋尘螨Derp1～2；粉尘螨Derf1～2；猫毛Feld1、狗毛Canf1或豚草中的致敏蛋白，或与所述过敏原蛋白共享抗体表位的变体或片段；所述过敏原的基因通过RT-PCR扩增获得。

4.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体为真核表达载体或原核表达载体。

5.根据权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体为昆虫表达载体、酵母表达载体或植物表达载体。

6.一种重组融合碱性磷酸酶-过敏原蛋白的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将权利要求1-5之一所述的表达载体转染宿主细胞进行表达；

(2)筛选并建立稳定细胞系；

(3)摇瓶发酵表达目的蛋白。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述宿主细胞为哺乳细胞、昆虫表达系统、酵母表达系统或植物表达系统。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述哺乳细胞为CHO或HEK293。

9.权利要求6-8之一所述方法获得的重组融合碱性磷酸酶-过敏原蛋白。

10.一种检测过敏原特异性IgE抗体的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：已包被抗人IgE的酶标板、权利要求9所述重组融合碱性磷酸酶-过敏原蛋白、样品稀释液和底物显色液；

所述样品稀释液为10mmol/L pH7.4-7.6的磷酸盐缓冲液，所述磷酸盐缓冲液中含质量百分比为1％的BSA和体积百分比为0.05％的Tween-20；

所述底物显色液为碱性磷酸酶化学发光液或者BCIP/NBT。