[发明专利]一种转化解脂耶氏酵母及其构建方法与应用

说明书

本发明公开了一种转化解脂耶氏酵母及其构建方法与应用。该转化解脂耶氏酵母，包括如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列，用于实现饲料用脂肪酶与单细胞蛋白的联产；在YPD液体培养基、装液量10％、转速250rpm、培养温度28℃、以及培养时间84h的培养条件下，该转化解脂耶氏酵母的蛋白质含量为60％～70％，干重为32g/L～39g/L，饲料用脂肪酶的产量为3200U/ml～5900U/ml。本发明通过基因工程方法构建了转化解脂耶氏酵母，实现了饲料用脂肪酶与单细胞蛋白的联产，以同时提高两种目标产物的含量。

技术领域

本发明属于生物技术与饲料行业领域，更具体地，涉及一种转化解脂耶氏酵母及其构建方法与应用。

背景技术

脂肪酶(lipase)是一类典型的羧酸水解酶，因能催化水解、酯化、转酯化等多种反应类型而广泛应用于食品、医药、能源、环境等领域，但脂肪酶在饲料方面的应用开发相对其它饲用酶仍处于起步阶段。绝大多数微生物脂肪酶为碱性脂肪酶，对动物肠胃的酸性pH与消化酶环境的耐受性低，在动物肠胃环境下难以发挥催化活力。以解脂耶氏酵母脂肪酶为代表的饲用脂肪酶具有耐受肠胃环境、生物安全性好、pH及温度性能优越等诸多饲用酶所需特点，具有很高的开发应用潜力。

现有技术可利用生物载体等进行脂肪酶的单产，如阎金勇等利用毕赤酵母表达生产脂肪酶，如吴兰等利用解脂耶氏酵母生产胞外脂肪酶；然而其产量不高，脂肪酶产量低于1000U/ml，菌体的干重通常低于20g/L，蛋白质含量低于50％。

现有技术通常采取物理化学工艺、或者发酵工艺的优化实现目标产物的产量的提高，然而仅能实现单目标产物的提高，且提高辐度有限。

发明内容

针对现有技术的以上缺陷或改进需求，本发明提供了一种转化解脂耶氏酵母，其目的在于实现饲料用脂肪酶与单细胞蛋白的联产，以同时提高两种目标产物的含量。

为实现上述目的，按照本发明的一个方面，提供了一种转化解脂耶氏酵母，包括如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列，用于实现饲料用脂肪酶与单细胞蛋白的联产。

优选地，所述转化解脂耶氏酵母的蛋白质含量为60％～70％。

优选地，在5％碳源的YPD液体培养基、装液量10％、转速250rpm、培养温度28℃、以及培养时间84h的培养条件下，所述转化解脂耶氏酵母的干重为32g/L～39g/L，饲料用脂肪酶的产量为3200U/ml～5900U/ml。

按照本发明的另一方面，提供了一种上述转化解脂耶氏酵母的构建方法，包括以下步骤：

(1)将饲料用脂肪酶基因连接至表达载体上，获得重组质粒；所述饲料用脂肪酶基因具有如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列；

(2)将重组质粒线性化，并转化解脂耶氏酵母的营养缺陷型感受态细胞；

(3)筛选转化后的营养缺陷型感受态细胞，获得所述转化解脂耶氏酵母。

优选地，所述表达载体为pINA1317载体或pINA1297载体。

优选地，所述营养缺陷型为尿嘧啶营养缺陷型。

作为进一步优选地，所述步骤(3)中的筛选方法为：利用无氨基酸培养基培养转化后的营养缺陷型感受态细胞。

作为更进一步优选地，所述无氨基酸培养基为YNBD(Yeast nitrogen base-glucose)无氨基酸固体培养基，其包括6g/L～8g/L酵母氮碱，10g/L～15g/L葡萄糖以及15g/L～20g/L琼脂，而不包括氨基酸。

按照本发明的另一方面，还提供了一种上述转化解脂耶氏酵母在饲料用脂肪酶与单细胞蛋白的联产中的应用。