[发明专利]一种鱼肉及其制品中生物胺的检测方法

说明书

本申请属于食品分析及安全领域，具体涉及一种鱼肉及其制品中生物胺的检测方法。本发明提供了一种鱼肉及其制品中生物胺的检测方法，结合丹磺酰氯柱前衍生法，利用反相高效液相色谱(RP‑HPLC)法构建了适用于鱼肉及其制品中生物胺检测的色谱条件以及梯度洗脱程序，实现了多种生物胺的最佳化分离；整个实验过程无需对样品进行净化处理，衍生过程简单，可减少有效成分的损失，使测量限达到μg/L级别，而且耗时短，可以实现大批量的样品的检测。

技术领域

本发明属于食品分析及安全领域，具体涉及一种鱼肉及其制品中生物胺的检测方法。

背景技术

生物胺是一类含氮的碱性有机化合物的总称，分子量低，在人体及动植物的组织中都含有少量的生物胺，是生物有机体内的正常活性成分，在机体内起着重要的生理作用。腐胺，精胺，亚精胺和尸胺等在调节核酸和蛋白质的合成及生物膜稳定性方面起着重要作用，是生物活性细胞必不可少的部分。同时多种食品和一些发酵产品中也普遍存在着生物胺，一般认为，食品中的生物胺大多是在食品中的微生物所产生的氨基酸脱羧酶的作用下，脱去氨基酸的羧基而生成的，故含有蛋白质和氨基酸的食品，在一定条件下经过发酵或生化反应便可产生生物胺，目前已发现水产品、肉制品、乳制品、葡萄酒等食品中均含有多种生物胺。

然而，过量的生物胺会对人体造成严重的毒害作用，可造成人体神经系统和心血管系统的损伤，引起头痛、平滑肌痉挛、胃酸分泌过多、过敏、血压过高或过低等症状。此外，生物胺还有潜在的致癌性，组胺和多胺可与H2受体作用或促进血管生成而直接导致细胞转化和肿瘤。而且，生物胺与亚硝酸盐等食品防腐剂可互相反应生成具有明显诱变性和潜在致癌性的亚硝胺而间接致癌。生物胺往往发生于食品腐烂或发酵过程中，食物中毒的发作和某些毒理学特性和组胺及酪胺有密切联系。因此，对生物胺的研究和认识可以提高、改善食品的质量及安全性。

目前，用于同时测定鱼肉食品中的多种生物胺的技术主要为离子色谱(IC)、毛细管电泳(CE)、生物传感器或薄层电泳(TLC)等。然而，这些方法普遍存在精确度低、重现性和稳定性差等问题。因此，寻找一种精确度高、重现性好的用于检测鱼肉食品中生物胺的方法，是本领域技术人员亟待解决的技术问题。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种精确度高、重现性好的鱼肉及其制品中生物胺的检测方法。

本发明的具体实施方案如下：

本发明提供了一种鱼肉及其制品中生物胺的检测方法，包括：

a)将生物胺标准品溶液和内标混合，衍生处理后采用RP-HPLC进行分析检测，得到所述生物胺标准品溶液的高效液相色谱图；

b)将鱼肉制品提取液进行衍生化处理后采用RP-HPLC进行分析检测，得到所述鱼肉制品提取液的高效液相色谱图；

c)根据步骤a)和步骤b)得到的高效液相色谱图，确定所述鱼肉制品提取液中的生物胺种类及其含量。

优选的，所述RP-HPLC采用乙酸铵-乙腈作为流动相进行梯度洗脱；

所述乙酸铵的浓度为0.1mol/L，所述乙腈为色谱纯。

优选的，所述乙酸铵作为流动相A，所述乙腈作为流动相B；

所述梯度洗脱的程序设置为：0-5min为40％流动相A，5-15min为40％流动相A到30％流动相A，15-20min为30％流动相A到20％流动相A，20-24min为20％流动相A到10％流动相A，24-28min为10％流动相A到40％流动相A，28-35min为40％流动相A。

优选的，所述鱼肉制品提取液的制备包括：将鱼肉制品、三氯乙酸溶液和内标混合，震荡提取。

优选的，所述三氯乙酸溶液的质量百分比浓度为5％；