[发明专利]同时检测饲料中的脂溶性维生素和水溶性维生素的方法

权利要求书

1.一种同时检测饲料中的脂溶性维生素和水溶性维生素的方法，包括以下步骤：

（1）制备多种维生素标准溶液，包括：

水溶性维生素：VB₁、VB₃、VB₆、VB₂、VB₇、VB₁₂中至少一种，

和

脂溶性维生素：维生素A醋酸酯、维生素D₃、维生素E乙酸酯中至少一种；

采用HPLC-MS/MS检测标准溶液，得到标准曲线方程；

所述HPLC检测过程中的采用梯度洗脱，流动相包括流动相A：甲醇水溶液，和流动相B：甲酸水溶液；

其中，流动相A：甲醇水溶液中甲醇的体积比例大于95%，流动相B：甲酸水溶液中甲酸的含量低于1wt%；

梯度洗脱程序：流速为0.3mL/min，运行25min；

梯度条件：0~2min，流动相A 0.5→0.5%；2~8.5min，流动相A 0.5→56%；8.5~8.6min，流动相A 56.0→99.5%；8.6~20min，流动相A 99.5→99.5%；20~20.01min，流动相A 99.5→0.5%；

色谱柱选用以下之一：

C18-MGⅡ,pH 2-10, 3μm 2.0mmI.D.×150mm柱、

C18-MGⅢ,pH 2-10, 3μm 2.0mmI.D.×150mm柱、

ADME ,pH 2-10, 3μm 2.1mmI.D.×150mm柱、

AQ 5μm 2.1mm I.D.×150mm柱、

Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18, 2.1×50mm柱、

Waters ACQUITY UPLC HSS T3, 1.8μm 3.0×50mm柱、

Capcell PAK ADME, 3 μm 2.1 mm I.D×150 mm，

和Waters ACQUITY UPLC BEH, 1.7μm 2.1×50mm柱；

所述MS工作参数如下：ESI正离子扫描模式；多反应监测参数：干燥气温度325℃，干燥气流速11L/min，雾化气压力45psi，鞘气温度300℃，流速9L/min，毛细管电压4000V，喷嘴电压500V；

（2）称取样品到容量瓶中，加入提取溶液，超声提取10-30min，冷却定容，离心，用0.22μm有机相滤膜过滤上机，采用与步骤（1）相同的色谱参数和质谱检测参数进行分析测试；

所述提取溶液是，由提取溶液第一组分和提取溶液第二组分按照25-35：65-75体积比例混合配制而成的溶液；

所述提取溶液第一组分是0.03-0.07v%氨水溶液；

所述提取溶液第二组分是0.1-0.3% g/L的BHT甲醇溶液；

（3）根据步骤（1）和步骤（2）的检测结果计算得出样品中的脂溶性维生素和水溶性维生素的含量。

2.如权利要求1所述同时检测饲料中的脂溶性维生素和水溶性维生素的方法，其特征在于，所述提取溶液是：0.05%氨水溶液：0.2% BHT甲醇=25-35：65-75体积比配制成的混合溶液。

3.如权利要求2所述同时检测饲料中的脂溶性维生素和水溶性维生素的方法，其特征在于，所述提取溶液是：0.05v%氨水溶液：0.2% g/L的BHT甲醇=30：70溶液。

4.如权利要求1所述同时检测饲料中的脂溶性维生素和水溶性维生素的方法，其特征在于，采用梯度洗脱过程中，所述流动相A是含0.01-0.03v%氨水的96-99v%甲醇水溶液，所述流动相B是0.01-0.03wt%甲酸水溶液。

5.如权利要求4所述同时检测饲料中的脂溶性维生素和水溶性维生素的方法，其特征在于，所述流动相A是含0.02v%氨水的98v%甲醇水溶液，所述流动相B是0.02wt%甲酸水溶液。

6.如权利要求1所述同时检测饲料中的脂溶性维生素和水溶性维生素的方法，其特征在于，所述色谱柱为：Capcell PAK ADME 2.1 mm I.D×150 mm，3μm。

7.如权利要求1所述同时检测饲料中的脂溶性维生素和水溶性维生素的方法，其特征在于，步骤（2）中，加入提取溶液超声提取15-25min。