[发明专利]同时检测饲料中的脂溶性维生素和水溶性维生素的方法

说明书

本发明公开了一种同时检测饲料中的脂溶性维生素和水溶性维生素的方法，包括以下步骤：（1）制备多种维生素标准溶液，包括以下维生素中的至少两种以上：VB₁、VB₃、VB₆、VB₂、VB₇、VB₁₂、维生素A醋酸酯、维生素D₃、维生素E乙酸酯。采用HPLC‑MS/MS检测标准溶液，得到标准曲线方程。（2）称取5‑10g样品到容量瓶中，优选使用100毫升棕色容量瓶，加入提取溶液超声提取10‑30min，冷却定容，离心，用0.22μm有机相滤膜，过滤上机，采用与步骤1相同的梯度洗脱程序、质谱检测参数进行分析测试。（3）根据步骤1和步骤2的测量结果计算得出样品中的多种维生素的含量。本发明的检测方法将复杂的配合饲料成分中的多种来源的维生素成分实现一次性连续检测分析处理。

技术领域

本发明涉及一种高效液相色谱(HPLC)检测方法，特别涉及一种高效液相色谱联合质谱-质谱同时检测饲料中多种维生素的方法，包括脂溶性维生素和水溶性维生素的同时检测。

背景技术

由于水溶性维生素和脂溶性维生素溶解性差异大，其同时测定的方法报道较少。

Semahat Kucukkolbasi等报道了同时测定复合维生素药片中水溶性维生素和脂溶性维生素含量的方法。该方法采用三氟乙酸-甲醇(TFA-MeOH)体系提取复合维生素药片中的维生素，TFA-MeOH体系为流动相梯度洗脱，在Phenomenex Gemini C18柱中分离维生素，采用二极管阵列检测器(DAD)在不同波长处检测维生素B₁、B₃、B₉、B₁₂、V_C、p-氨基苯甲酸(PABA)、A、D₃和K，荧光检测器(FLD)在不同波长处检测维生素E和B₂。该方法在40分钟内同时检测了11种维生素，适用于复合维生素药片中维生素的检测。但是，其对于维生素含量低的饲料样品的测定有待进一步研究。

卢燕等采用双三元高效液相色谱多阀多柱技术，同时分析了样品中21种维生素。该方法采用水提取样品中水溶性维生素，甲醇-二氯甲烷体系提取样品中脂溶性维生素。水溶性维生素进入Acclaim PA色谱柱，用磷酸缓冲液、乙腈-磷酸缓冲液、甲醇-甲基丁基醚为流动相梯度洗脱；脂溶性维生素进入Acclaim C18色谱柱，用甲醇-乙腈、甲基丁基醚为流动相梯度洗脱。VWD 3400RS紫外检测器在不同波长处检测维生素。实际样品分析结果显示，该方法适用于富含维生素的维生素补充药品等的检测，但是，在饮料中，由于其溶解性的限制，只检测到几种水溶性维生素，同理，鸡饲料样品中也有部分低含量维生素未检出。

配合饲料中原料组成复杂，维生素来源较多，含量较低，用以上两种方法可能无法检出。亟待开发一种新的方法，用以同时检测饲料等低维生素含量样品中的水溶性维生素和脂溶性维生素。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中对于配合饲料中成分复杂，维生素来源较多，含量较低，无法在一次检测中实现同时完全检测的不足，提供一种同时检测饲料中的脂溶性维生素和水溶性维生素的方法。本发明方法能够在一次检测的过程中完成配合饲料中多种维生素的检测分析，具有监测分析效率高的特点，能够极大的简化对于配合饲料的多重检测分析。

为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

一种同时检测饲料中的脂溶性维生素和水溶性维生素的方法，包括以下步骤：