[发明专利]一种人源性asprosin蛋白的ELISA检测试剂盒及其用途

说明书

本发明提出一种人源性asprosin蛋白的ELISA检测试剂盒及其用途。该试剂盒包括以下组分：酶标板、标准品、阴性对照品、阳性对照品、样品稀释液、洗涤缓冲液、二抗、抗体稀释液、显色液和终止液；所述酶标板由一种特定的添加有生物素标签的人源性asprosin蛋白的多克隆抗体包被，并用封闭缓冲液封闭；二抗能够与作为一抗的多克隆抗体进行特异性的结合。该试剂盒能够快速检测人或者动物标本中的asprosin蛋白含量，耗时少，使用简便，而且结果特异性强、敏感度高。基于此，本发明还构建了用于辅助诊断多囊卵巢综合征(PCOS)的检测设备体系，该检测设备体系只需再配置37℃温箱、移液器和酶标仪。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种人源性asprosin蛋白的ELISA检测试剂盒。

背景技术

多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome，PCOS)是一种最常见的生殖障碍和代谢性综合征，一直以其高发生率(5％～10％)、多系统广泛迁延以及各年龄段持续深远的病理影响而成为妇科内分泌领域的研究热点和难点之一。目前PCOS病因和发病机制仍不明确，胰岛素抵抗(insulin resistance，IR)和高雄激素血症(hyperandrogenemia，HA)是其主要的病理特征，也常伴有肥胖、糖代谢异常、心血管疾病等合并症的发生。由于PCOS的异质性、临床表现的多态性，给临床诊断和治疗带来极大困难，PCOS的诊断一直是极具争议的话题。

目前，国际上先后有三个PCOS诊断标准被广泛应用。第一个是来源于由NIH(美国国立卫生研究院)于1990年4月举行的专家会议的报告。报告中指出PCOS的主要诊断标准应包括:雄激素过多症和/或高雄激素血症，月经失调，并排除其它已知疾病。这一调查把PCOS定义为是一种经过排除诊断后的雄激素过量性疾病，伴有卵巢的原因和/或结果。

第二个是成形于2003年5月在鹿特丹召开的欧洲生殖和人类胚胎学会和美国生殖医学会举办的专家会议。会议中提出PCOS的定义需至少满足以下3个特点中的2个:①稀发和/或无排卵；②雄激素过多症的临床和/或生化表现；③多囊卵巢。诊断PCOS前也需要首先排除其它雄激素过量或相关疾病。

2006年，AES(美国雄激素过多协会)提出第三个PCOS诊断标准，指出PCOS诊断必需满足高雄激素这一特点，而排卵障碍和多囊卵巢存在二者之一即可诊断。

三种标准从不同出发点给出了PCOS的定义，也凸显出了对疾病不完全相同的认识，多个诊断标准的并存给临床工作造成较大困难。

一项涵盖106项研究共15129例受试者的Meta分析显示，PCOS患者发生超重、肥胖和中心性肥胖的风险比分别为1.95、2.77和1.73。对于糖耐量受损、糖尿病和代谢综合征的识别在PCOS治疗选择时也有重要意义。数据表明与正常对照相比，PCOS患者上述三种代谢改变的发生风险分别增加2.48、4.43、2.88倍。多中心大数据的研究显示，肥胖和糖代谢异常可作为PCOS的辅助诊断标准。

对于初诊的PCOS患者，临床一般是通过B超检测、雄激素水平进行排除性诊断，国内外尚缺乏针对肥胖和糖代谢异常的PCOS诊断标志物。

Asprosin是2016年4月《Cell》期刊报道的一种新型的葡萄糖调控蛋白质激素，由白色脂肪组织分泌、释放并运输至肝脏。研究发现，Asprosin可与肝细胞表面受体结合，通过激活G蛋白-cAMP-PKA信号通路来增加肝细胞中葡萄糖的释放。同时Asprosin的作用是跟胰岛素功能亢进相关，Asprosin含量的增加会导致胰岛素的耐受性，进一步提高血糖的含量。

上述研究表明，asprosin的含量和肥胖及高血糖呈正相关。可能成为肥胖及糖代谢异常的标志物，亦可能成为PCOS的生物标志物，并作为辅助检测来确诊PCOS。