[发明专利]一种提高胰岛素前体产量的方法有效
| 申请号： | 201611226771.8 | 申请日： | 2016-12-27 |
| 公开（公告）号： | CN106699872B | 公开（公告）日： | 2019-12-24 |
| 发明（设计）人： | 吴静;梁晨晨 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C07K14/62 | 分类号： | C07K14/62;C12N15/17;C12N1/19;C12N15/81;C12P21/02;C12R1/84 |
| 代理公司： | 23211 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 | 代理人： | 彭素琴 |
| 地址： | 214122 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 胰岛素前体 菌株 生物工程技术领域 表达载体pPIC9K 分子生物学手段 高密度发酵 毕赤酵母 重组菌株 高拷贝 工程菌 共表达 双酶切 构建 菌种 基因 | ||
【权利要求书】：
1.一种胰岛素前体，其特征在于，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
2.编码权利要求1所述胰岛素前体的基因。
3.一种产胰岛素前体的重组菌，其特征在于，以毕赤酵母为宿主，以pPIC9K为载体，表达SEQ ID NO.1所示基因；还表达SNC2基因或Sso2基因；所述SNC2基因的核苷酸序列如SEQID NO.3所示；所述Sso2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。
4.一种生产胰岛素前体的重组菌的构建方法，其特征在于，以pPIC9K为载体，在毕赤酵母中表达SEQ ID NO.1所示的编码胰岛素前体的基因；还以pPICZα为载体，表达SEQ IDNO.3所示的SNC2基因或SEQ ID NO.5所示的Sso2基因。
5.一种生产胰岛素前体的方法，其特征在于，所述方法是将权利要求3所述的重组菌培养至OD600＝2.0-6.0，加入甲醇诱导胰岛素前体的表达。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，将所述的重组菌以按体积10％的接种量接种至发酵培养基中，控制pH为5.2～5.8，当甘油耗尽时，以16～20mL/(L·h)的速率流加甘油，4-6h后停止，待甘油再次耗尽并饥饿菌体1.5～3h后，开始流加甲醇，并维持培养基中的甲醇浓度在1.8～2.2g/L。
7.权利要求3所述重组菌在食品、化工、医药领域制备含胰岛素的产品中的应用。
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