[发明专利]游离载体将血液变成皮肤用于治疗严重皮肤损伤的方法

说明书

技术领域：

本发明涉及游离载体将血液变成皮肤用于治疗严重皮肤损伤的方法，属于医疗技术领域。

背景技术：

植皮是治疗创伤、手术、烧伤、运动损伤所致的严重皮肤损伤的唯一方法。皮肤疤痕是一个重要的医学问题，它通常导致美观受损、功能丧失、组织运动和/或组织生长受限和不良的心理影响。最常见的疤痕畸形常常发生在烧伤后，据报道，这是在许多国家导致发病率和死亡率的重要原因。在成人中，大规模全层烧伤的正常修复是纤维化和瘢痕形成，不伴有任何附属物，包括毛囊，汗腺和皮脂腺的修复。自体皮肤移植被认为是对于裂开的烧伤伤口的理想疗法在皮肤移植中最常见的操作是啮合-啮合机在皮片移植物中切割小孔以产生网状图案，从而增加了刃厚皮片的尺寸。这一操作还有利于血液和组织液引流，可防止严重的血肿形成，并且能使移植物更好地贴合伤口。不幸的是，啮合使伤口愈合后的疤痕不美观。对于具有面积烧伤的患者，可用于自体皮片移植和瘢痕疙瘩的部位是有限的，且通常继发瘢痕组织的过度积累。

疤痕由于通常损害功能，阻碍生长并影响皮肤美观，一被公认为是严重的负面影响因素。瘢痕形成的基本机制被认为是：如果皮肤细胞不能足够快速增生并且成纤维细胞增生太快，则将导致密集的成纤维细胞网形成。这密集的成纤维细胞网不容易被皮肤细胞穿透，因此皮肤细胞很难替代成纤维细胞。结果是成纤维细胞的密集网络，换句话说，就是疤痕。因此，严重皮肤损伤后难以有效愈合和瘢痕形成的根本原因是伤口处缺少皮肤干细胞。即使在对移植的皮片进行网格划分，皮肤(干)细胞也不均匀分布，因此在网孔中，成纤维细胞比皮肤干细胞迁移和增殖更快地增生，最终导致在网孔处瘢痕形成。

近年来，人工皮肤替代品的研究取得了很大进展；然而，通过在体外组装各个组分来获得可行的皮肤替代物还未成功。此外，在由已知皮肤替代物治疗的在深层或全层烧伤的愈合过程中，伤口收缩和瘢痕形成仍然是不可避免的。目前，含有干细胞的替代品不仅暂时防止体液和细菌感染的损失，而且获得令人满意的修复效果烧伤创面的最佳愈合需要对细胞迁移和增生以及细胞外基质沉积和重塑的复杂生物分子机制进行精心整合。干细胞治疗可以改善烧伤伤口愈合的质量，减少疤痕的形成并重新建立皮肤及其附属物的正常功能。

常规皮肤移植治疗的另一个缺点是，没有足够的供体皮肤用于移植。在这种情况下唯一有希望的解决方案是将其他类型的细胞转分化成皮肤干细胞。可以从皮肤细胞分离iPS细胞并将iPS细胞分化为皮肤干细胞。但这种方法需要2-3个月，需要大多数患者等待的时间太长。

发明内容：

针对上述问题，本发明要解决的技术问题是提供游离载体将血液变成皮肤用于治疗严重皮肤损伤的方法。

本发明游离载体将血液变成皮肤用于治疗严重皮肤损伤的方法,它的具体方法为：它的具体方法为：步骤一：将血液转化为皮肤的游离载体，用含有10-300ng/ml细胞因子SCF、TPO、FL、用商业试剂盒将表达转分化因子如OCT4，KLF4和p63的游离载体以核转染的方式转染细胞，在转染后的前4-7天，用造血细胞培养基和表皮细胞培养基以1:1方式配制混合培养基培养细胞，用于皮肤干细胞培养的培养基是商用角质形成细胞培养基加ALK5抑制剂，BMP7，KGF-1和EGF,转染后4-7天，将细胞在100％皮肤干细胞培养基中培养2周，离体培养2-3周后，80-90％的细胞丧失游离载体；为了防止游离载体用于细胞治疗的任何潜在的安全性问题，通过施用更昔洛韦1-2天杀死剩余的10％的携带游离载体的细胞，即为皮肤干细胞；

步骤二：皮肤干细胞的移植，在移植之前，将血液转变的皮肤干细胞以10⁴-10⁵/cm²密度种植到交联的人胶原蛋白上，用5-10mg/ml胶原蛋白制备胶原片，为了提高细胞存活和加速新生血管形成，将VEGF，KGF-1和EGF包埋到胶原片中，再将细胞种植到胶原片上4-24小时后，在手术清创后将移植物涂覆至损伤的皮肤，1个月内将实现快速无疤痕愈合，移植一个月后，交联的胶原被迁移的免疫细胞和分化的表皮细胞降解。

作为优选，所述的步骤一制备的皮肤干细胞可用在含有聚(N-异丙基丙烯酰胺)的智能表面移植无基质的衍生皮肤细胞这一细胞片技术。