[发明专利]一种花生对黄曲霉侵染抗性的鉴定方法及其应用

权利要求书

1.一种花生对黄曲霉侵染抗性的鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1，黄曲霉菌株经活化后，洗脱黄曲霉孢子，制备成黄曲霉孢子悬浮液，备用；

步骤2，选择健康的花生种子，剥壳、去皮，然后粉碎成粉末，过40目筛，将得到的花生粉浸泡于体积分数为75％的乙醇中3-5min，然后无菌水冲洗干净，最后沥干水分，得到种子样品，备用；

步骤3，按以下结构制作培养装置：所述培养装置包括培养皿(1)，围绕所述培养皿(1)的内壁设有可拆卸的环形支架(2)，并且所述环形支架(2)放置于所述培养皿(1)内底部，所述环形支架(2)上搭接有水平的透明网格板(3)，所述透明网格板(3)为具有若干正方形格子的网状结构，且每个正方形格子的边长均相等；

步骤4，无菌条件下称取一定质量的种子样品，平铺于培养皿(1)中，向培养皿(1)中种子样品的中央滴加黄曲霉孢子悬浮液，种子样品位于透明网格板(3)的下方，并与透明网格板(3)之间留有一定距离；然后将培养装置于25-30℃暗培养3-7天，直至长出样品组霉菌圈，通过统计透明网格板(3)上与样品组霉菌圈相对的正方形格子的数量，计算出样品组霉菌圈的面积A1，并予以记录；

步骤5，以等同于步骤4中所述种子样品质量的察氏培养基作为对照，操作与步骤4相同，区别仅在于：用察氏培养基培养黄曲霉，直至长出对照组霉菌圈，然后通过统计透明网格板(3)上与对照组霉菌圈相对的正方形格子的数量，计算出对照组霉菌圈的面积C1，并予以记录；

步骤6，结果判断，通过黄曲霉感染指数F1评价种子样品对黄曲霉的浸染抗性：

其中，黄曲霉感染指数按以下公式计算：F1＝A1/C1。

2.根据权利要求1所述的花生对黄曲霉侵染抗性的鉴定方法，其特征在于，步骤1中，利用体积分数为5％的醋酸溶液洗脱黄曲霉孢子。

3.根据权利要求1所述的花生对黄曲霉侵染抗性的鉴定方法，其特征在于，步骤1中，黄曲霉孢子浓度为10⁵个/ml。

4.根据权利要求1所述的花生对黄曲霉侵染抗性的鉴定方法，其特征在于，步骤3中，每个正方形格子的边长为2-4mm。

5.根据权利要求4所述的花生对黄曲霉侵染抗性的鉴定方法，其特征在于，步骤3中，每25个正方形格子组成一个大方格，相邻两个大方格的共用边均设置为红色。

6.根据权利要求1所述的花生对黄曲霉侵染抗性的鉴定方法，其特征在于，还包括黄曲霉毒素检测步骤，具体为：

步骤a，将步骤4长出样品组霉菌圈的培养装置置于365nm的紫外光下，观察样品组黄曲霉产生的黄曲霉毒素的荧光圈大小，通过统计透明网格板(3)上与荧光圈相对的正方形格子的数量，计算出荧光圈的面积A2，并予以记录；

步骤b，将步骤5长出对照组霉菌圈的培养装置置于365nm的紫外光下，观察对照组黄曲霉产生的黄曲霉毒素的荧光圈大小，通过统计透明网格板(3)上与荧光圈相对的正方形格子的数量，计算出荧光圈的面积C2，并予以记录；

步骤c，结果判断，通过黄曲霉毒素产生指数F2评价种子样品对黄曲霉的浸染抗性：

其中，黄曲霉毒素产生指数按以下公式计算：F2＝A2/C2。

7.根据权利要求1-6任一项所述的花生对黄曲霉侵染抗性的鉴定方法在快速、批量筛选具有黄曲霉浸染抗性的花生品种中的应用。