[发明专利]一种免疫球蛋白M检测试剂盒及检测方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种免疫球蛋白M检测试剂盒及检测方法。

背景技术

免疫球蛋白是一组具有抗体活性的蛋白质，主要存在于血浆中，也见于其他体液、组织和一些分泌液中。免疫球蛋白分为五类，即免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白D(IgD)和免疫球蛋白E(IgE)。其中，IgM是五类免疫球蛋白中分子量最大的一种。其分子量为9×10⁵道尔顿，故又称为巨球蛋白。在正常人血清中的平均浓度为60～180mg％，约占血清总免疫球蛋白的6％。IgM的升高常见于巨球蛋白血症、细菌和寄生虫传染病、肝脏疾病、类风湿性关节炎及胆囊纤维症等。IgM的减少常见于原发性无丙种球蛋白血症，非IgA和IgG型多发性骨髓瘤，霍奇金病，慢性淋巴细胞白血病，蛋白丧失性胃肠病等。

目前临床上使用较为广泛的免疫球蛋白A的检测方法为酶联免疫吸附法和高效液相色谱法，酶联免疫吸附法操作过程复杂，耗时长，且对操作人员有较高的专业技术要求高，而且检测不准确。而随着生化检测技术的不断改进和完善，由于比浊法用于免疫球蛋白测定，具有快速、准确、就爱你百纳、易于自动化等优点，正日益受到人们的关注。

如中国专利申请CN104407159A公开了一种免疫球蛋白IgM免疫比浊法检测试剂盒，它包含试剂R1、试剂R2和校准品，其中试剂R1组成为：pH7.6Tris缓冲液、氯化钠、聚乙二醇400、二氧化硅包覆的磁性纳米颗粒；试剂R2组成为：pH 7.6Tris缓冲液、羊抗人IgM抗体、牛血清白蛋白、Kathon-CG。该试剂盒通过在试剂R1中加入一定量的二氧化硅包覆的磁性纳米颗粒和在试剂R2中加入一定量的牛血清白蛋白和Kathon-CG，有效的提高了试剂盒的稳定性和分析灵敏度，其线性范围也较好，试剂的准确度高，有利于在市场中进一步的推广使用。但是该试剂盒忽略了磁颗粒的聚集现象，在实际应用中，磁颗粒倾向于黏附于反应器内壁，降低了免疫反应，从而导致试剂盒的灵敏度下降，另外，该试剂盒抗原和抗体的结合不够稳定，易解离，特异性不强。

中国专利申请CN105572384A公开了一种高性价比的人血液免疫球蛋白G检测试剂盒，包括试剂2，所述试剂2为标记有兔抗人免疫球蛋白G多克隆抗体的胶乳颗粒溶液；其中，所述胶乳颗粒粒径范围为40nm～120nm，每升试剂2中抗体的用量为20ml～30ml。但是该试剂盒未能解决抗体在稀溶液中稳定性的问题。

因此，有必要提供一种灵敏度高、特异性强、准确度高、稳定性高的试剂盒。

发明内容

为了解决现有技术中存在的技术问题，本发明的目的在于提供一种免疫球蛋白M检测试剂盒，其解决了因磁微粒倾向聚集的现象和抗体不稳定导致现有的试剂盒的特异性和稳定性不高的问题。

本发明提供了一种免疫球蛋白M检测试剂盒，包括试剂R1、试剂R2和免疫球蛋白M标准品，所述试剂R1包括第一缓冲液20～300mmol/L、促进剂5～50mmol/L、聚乙二醇-400 0.5～10g/L和氯化钠5～50g/L；所述试剂R2包括第二缓冲液20～300mmol/L、抗人免疫球蛋白M抗体包被的磁微粒10～50％w/v、氯化钠5～50g/L和稳定剂0.5～10g/L。

进一步地，所述第一缓冲液、所述第二缓冲液选自PBS缓冲液、Tris缓冲液和醋酸盐缓冲液中的一种。

进一步地，所述促进剂由非极性氨基酸和CHAPS按1:(0.5～2)的重量比在组成。

进一步地，所述促进剂由非极性氨基酸和CHAPS按1:0.8的重量比在组成。

进一步地，所述非极性氨基酸选自苯丙氨酸、亮氨酸和缬氨酸中的一种或几种。

进一步地，所述非极性氨基酸由苯丙氨酸和亮氨酸按1:(0.02～0.1)的重量比在组成。

进一步地，所述非极性氨基酸由苯丙氨酸和亮氨酸按1:0.06的重量比在组成。

进一步地，所述稳定剂包括以下重量份数的组份：聚乙烯吡咯烷酮0.05～2份、二硫苏糖醇0.01～0.1份、无机盐0.1～2份、牛血清白蛋白0.05～2份和甘油1～2份。

进一步地，所述稳定剂包括以下重量份数的组份：聚乙烯吡咯烷酮1.2份、二硫苏糖醇0.06份、无机盐1.5份、牛血清白蛋白1份和甘油1.5份。

进一步地，所述无机盐选自氯化钙、氯化钠、氯化钾、溴化钙、溴化钠、溴化钾、硫酸钠和硫酸钾中的一种或几种。

进一步地，所述无机盐选自氯化钙。