[发明专利]一种辐照水产干制品的检测方法

权利要求书

1.一种辐照水产干制品的检测方法，其特征在于，步骤如下：

一、样品前处理

(1)样品处理：将待测样品粉碎后装入容器内，密封、冷藏备用；

(2)酸解：称取样品0.2g加入20mL酸解玻璃管中，加入10mL 6moL/L盐酸，充氮气后盖紧旋盖，于110℃下酸解过夜得酸解液；

(3)净化：取酸解液用滤纸过滤后，置于玻璃离心管中，4℃下12000r/min离心10min，取上清液5mL，35℃下氮气吹干，接着冻干机冻干，用1mL 0.1％甲酸水溶液溶解冻干物，0.22μm水相尼龙滤膜过滤，滤液作为样品液用于2-羟基苯丙氨酸和3-羟基苯丙氨酸的检测；同时，取100μL滤液用0.1％甲酸水溶液定容至1mL得稀释10倍后的样品液用于酪氨酸和苯丙氨酸检测；

二、QTRAP-UPLC-MS/MS检测分析

以酪氨酸、苯丙氨酸以及辐照特异性产物2-羟基苯丙氨酸和3-羟基苯丙氨酸为标准品，将辐照质谱响应值峰面积作为横坐标，对酪氨酸、苯丙氨酸、2-羟基苯丙氨酸和3-羟基苯丙氨酸浓度作为纵坐标，绘制标准曲线；用MRM-IDA-EPI模式，将四种标准物质的二级图谱存入谱库，以便样品与之比对；

将样品液及稀释10倍后的样品液均上机检测，将待测物质的对应离子对与标准图谱进行匹配，以Purity值为判断依据，大于70％认为是同一物质，并对其进行定量；

待测样品含2-羟基苯丙氨酸和3-羟基苯丙氨酸代表接受过辐照处理，并根据标准曲线计算所含2-羟基苯丙氨酸和3-羟基苯丙氨酸的含量；

三、辐照剂量定量检测

以辐照剂量为横坐标，3-羟基苯丙氨酸和2-羟基苯丙氨酸含量为纵坐标绘制标准曲线，将待测样品中3-羟基苯丙氨酸和2-羟基苯丙氨酸的含量代入标准曲线以确定待测样品所接受过的辐照剂量；

四、质量控制

每次测定均采用空白和阳性对照样品；空白对照为阴性样品，即未经辐照的同类型水产品作为空白对照，阳性样品为经已知辐照剂量辐照后的待检样品同类型水产品；其中

QTRAP-UPLC-MS/MS检测分析的色谱参数设置为：色谱分离条件：Waters Acquity UPLCBEH C18柱，流速0.4mL/min；流动相A：甲醇，流动相B：0.1％甲酸水溶液；进样量：2μL；柱温：35℃；流动相的梯度洗脱程序为：0-5min，流动相B比例从5％调整到30％，之后5.1min-8min，在13-13.5min内将流动相B比例从30％调整到5％；

QTRAP-UPLC-MS/MS检测分析的质谱条件为：离子源Turbo V，电离模式ESI+，采集方式MRM模式，离子化温度550℃；喷雾电压5500V，雾化气55psi，辅助气60psi，气帘气30psi，碰撞气为High；入口电压10v，碰撞室出口电压13v；

MRM-IDA-EPI模式参数设置为：IDA触发信号强度阈值5000；EPI条件：扫描速率10000Da/s；扫描范围：50-200Da；Souce/Gas条件同MRM；DP电压80v；碰撞能量35v，碰撞能量谱宽为15。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤二中，绘制标准曲线时，标准品的浓度梯度设置为：5μg/L、10μg/L、50μg/L、100μg/L、500μg/L，按照标准品的浓度梯度设置对应配制同时含有酪氨酸、苯丙氨酸、2-羟基苯丙氨酸和3-羟基苯丙氨酸的混合标准溶液。

3.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，步骤三中，绘制标准曲线的方法具体为：取未经辐照的对照样品，用X光辐照仪分别进行0kGy、1kGy、2kGy、5kGy、10kGy、20kGy剂量的辐照，按照步骤一样品前处理方法进行处理后，用MRM-IDA-EPI模式上机分别检测经不同剂量辐照后的对照样品中的3-羟基苯丙氨酸和2-羟基苯丙氨酸的含量以及二次定性，将辐照剂量做为横坐标，3-羟基苯丙氨酸和2-羟基苯丙氨酸含量作为纵坐标，分别求出回归方程与相关系数并绘制标准曲线。