[发明专利]一种丝素亲和肽的筛选方法

权利要求书

1.一种丝素亲和肽的筛选方法，其特征是采用如下步骤：

1)制备丝素膜材料；

所述步骤1)中的丝素膜材料采用以下方式进行制备：先将蚕丝蛋白粉末溶于有机溶剂或者水中形成蚕丝蛋白溶液，将蚕丝蛋白溶液滴在聚乙烯板上风干，加酒精处理使蚕丝蛋白固化，得到不溶解于水的丝素膜；

2)利用丝素膜材料对各种噬菌体进行筛选，获得能够与丝素膜特异性结合的噬菌体；

所述步骤2)具体为：

a.封闭丝素膜材料：将丝素膜材料加入含有TBS和BSA的缓冲液；

b.丝素膜材料对噬菌体库的筛选：将噬菌体肽加入到丝素膜的缓冲液中，常温摇床中以160rpm转速下摇振0.5-8h；

c.洗涤：用洗涤液将丝素膜洗涤1-10遍；

d.洗脱：将洗涤液除去，加入洗脱液常温孵育1-20分钟，将与丝素膜材料特异性结合的噬菌体洗脱下来；

e.中和：加入中和液，使得洗脱后的噬菌体液与中和液混匀后呈中性；

f.噬菌体扩增：将中和后的噬菌体液转入到ER2738菌中，在37℃温度的摇床中以150-220rpm转速摇振3-24h，得到噬菌体和ER2738菌混合液；

g.噬菌体纯化：将噬菌体和ER2738菌混合液进行离心，再加入到PEG和NaCl的混合液中进行纯化，得到亲和丝素膜材料的噬菌体菌液；

i.将步骤a～g经过2-6次重复循环之后，得到与丝素膜材料特异性结合的噬菌体液；

3)将步骤(2)中与丝素膜材料特异性结合的噬菌体进行基因测序，获得相应的基因序列，进而推导出其氨基酸序列。

2.如权利要求1所述的一种丝素亲和肽的筛选方法，其特征在于：所述步骤2)中的洗涤包括用TBST、磷酸盐缓冲液、模拟体液、生理盐水、Tris-HCl缓冲液，洗涤次数为1-10遍。

3.如权利要求1所述的一种丝素亲和肽的筛选方法，其特征在于：所述步骤2)中的洗脱包括用Gly-HCl洗脱液或者酸性、碱性洗脱液。

4.如权利要求1所述的一种丝素亲和肽的筛选方法，其特征在于：所述步骤2)中的中和液采用Tris-HCl中和液。