[发明专利]一种离体沉香木结香方法

权利要求书

1.一种离体沉香木结香方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)沉香预处理：截取新鲜沉香木段，剥去表皮，消毒冲洗，打孔，备用；

(2)结香菌种的准备：将沉香菌种经液体培养得到液体菌液，过滤，收集菌丝；

(3)接种：将菌丝塞入沉香木的孔内，并把沉香木浸泡在过滤后的液体菌液内，在已灭菌的培养瓶内生长30d以上，得到沉香；

所述步骤(2)中，将沉香菌种经液体培养得到液体菌液，过滤，收集菌丝的步骤具体为：

a、配制PD培养基，分装后进行灭菌；

b、取沉香菌种2-3种分别接种在分装后的不同的PD培养基中，先静置培养再振荡培养，得到液体菌液；

c、将培养后的液体菌液在无菌室内过滤，收集菌丝；

所述步骤a中，每升PD培养基包括如下组分：鲜沉香木100-300g、葡萄糖18-22g和土豆180-220g；

所述步骤a中，PD培养基的制备方法为：

a1、熬煮：取100-300g鲜沉香木切碎，加入1000mL水中预煮35-45min；将土豆180-220g去皮后切成小块放入水中，加热至沸腾，维持20-30min，至土豆可捣碎为止；趁热过滤，滤液加水补充至1000mL；

a2、溶解：把滤液放入锅中，加入18-22g葡萄糖，小火加热，搅拌均匀，加水补充至所需量，制得PD培养基；

a3、灭菌：将PD培养基分装在250mL的三角烧瓶中，每瓶装量为200mL，瓶口加棉塞后再包扎牛皮纸封口，在1.3-1.5kg/cm²压力下灭菌20-30min，取出冷却到30℃以下；

所述步骤b中，静置培养的温度为23-25℃，培养时间为42-54h；振荡培养采用复式摇床，其振荡频率为80-100次/min，振幅为6-10cm；或者采用旋转式摇床，其振荡频率为200-220转/min，振荡培养室温控制在25-30℃，振荡培养3-10d。

2.根据权利要求1所述的一种离体沉香木结香方法，其特征在于：所述步骤(1)具体为：截取长度为2-10cm的新鲜沉香木段，剥去表皮，表面消毒后用无菌水冲洗，用电钻在沉香木段表面打孔2-3个，备用。