[发明专利]一种离体沉香木结香方法

说明书

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种离体沉香木结香方法，包括如下步骤：（1）截取新鲜沉香木段，剥去表皮，消毒冲洗，打孔，备用；（2）将沉香菌种经固体培养得到固体菌种；或者，将沉香菌种经液体培养得到液体菌液，过滤，收集菌丝；（3）将固体菌种接种在沉香木的孔内，接种的沉香木放在已经灭菌过的培养瓶中，瓶底放入湿棉花，生长30d以上，得到沉香；或者，将菌丝塞入沉香木的孔内，并把沉香木浸泡在过滤后的液体菌液内，在已灭菌的培养瓶内生长30d以上，得到沉香。本发明的离体沉香木结香方法生产工艺简单，成本低，周期短，不受树龄的限制，不受气候和土壤的限制，充分的利用和保护了沉香资源。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种离体沉香木结香方法。

背景技术

目前沉香结香方法一般在活体的沉香属植物上进行，容易受户外种植环境的影响。本发明通过切取沉香属植物枝干的一部分（长约2-10cm,直径1~8cm），通过在新鲜的沉香属植物上接种沉香菌种（从沉香属植物中分离），或者浸泡在结香菌液中，30天后离体沉香木出现颜色变化，逐渐变黑，剔除变色部门的沉香木GC-MS检测含有挥发性成分。

现有沉香结香方法有在活体沉香属植物砍伤法、半断干法、化学法和人工接种结香法，结香效率不高，结香不稳定，操作复杂，生产成本高。

类似的技术有申请号为201310522116.7的中国发明专利公开了一种以植物组织培养方式制作沉香的方法，先提供一种沉香植株培植体，沉香植株培植体的组织与细胞再生为沉香植株，在沉香植株上完成微生物接种和结香实验。然而这种技术需要组织培养再生，过程中容易污染，需要重复操作，降低生产效率。

发明内容

为了克服现有技术中存在的缺点和不足，本发明的目的在于提供一种离体沉香木结香方法，该结香方法生产工艺简单，成本低，周期短，不受树龄的限制，不受气候和土壤的限制，充分的利用和保护了沉香资源。

本发明的目的通过下述技术方案实现：一种离体沉香木结香方法，包括如下步骤：

（1）沉香预处理：截取新鲜沉香木段，剥去表皮，消毒冲洗，打孔，备用；

（2）结香菌种的准备：将沉香菌种经固体培养得到固体菌种；或者，将沉香菌种经液体培养得到液体菌液，过滤，收集菌丝；

（3）接种：将固体菌种接种在沉香木的孔内，接种的沉香木放在已经灭菌过的培养瓶中，瓶底放入湿棉花，生长30d以上，得到沉香；或者，将菌丝塞入沉香木的孔内，并把沉香木浸泡在过滤后的液体菌液内，在已灭菌的培养瓶内生长30d以上，得到沉香。

沉香菌种主要是真菌，从沉香属植物上分离出来，经过纯化和鉴定，它们大多是硬孔菌属、拟层孔菌属、可可毛色二孢属、镰刀菌属、拟盘多毛孢属、头孢菌属、霉属、腐木菌属或小球壳菌属。

优选的，所述步骤（1）具体为：截取长度为2-10cm的新鲜沉香木段，剥去表皮，表面消毒后用无菌水冲洗，用电钻在沉香木段表面打孔2-3个，备用。

优选的，所述步骤（2）中，将沉香菌种经固体培养得到固体菌种的步骤具体为：

A、配制PDA培养基；

B、将PDA培养基在无菌室中倒平板，制得多个平板培养基；

C、取2-3种不同的沉香菌种分别接种在不同的平板培养基中培养，得到固体菌种。

优选的，所述步骤A中，每升PDA培养基包括如下组分：鲜沉香木100-300g、葡萄糖18-22g、琼脂15-20g和土豆180-220g。

优选的，所述步骤A中，PDA培养基的制备方法具体为：