[发明专利]一种多价肺炎球菌荚膜多糖结合疫苗的制备方法

说明书

本发明涉及疫苗制备，具体公开了一种多价肺炎球菌荚膜多糖结合疫苗的制备方法：基于配制的终体积，先加入氯化钠和聚山梨酯80，之后再加入铝佐剂，根据不同血清型肺炎球菌荚膜多糖‑蛋白结合物原液与铝佐剂的吸附率，将吸附率较低的血清型优先进行吸附，再对其它血清型结合物进行吸附，最后加入琥珀酸提高溶液缓冲能力。采用本发明提供的方法制备得到的多价肺炎球菌荚膜多糖结合疫苗，吸附率高，稳定性好，可在控制多糖及蛋白载体含量的条件下，最大限度的发挥多价肺炎球菌结合疫苗的免疫效果。

技术领域

本发明涉及疫苗制备，具体地说，涉及一种多价肺炎球菌荚膜多糖结合疫苗的制备方法。

背景技术

抗原与佐剂的吸附率是决定疫苗免疫效果的关键因素，在吸附过程中，抗原与佐剂通过静电力等物理作用力相互结合，通过增加抗原的表面积，可增强抗原的免疫效果。同时，佐剂吸附的疫苗可在接种点产生“储存库效应”，使抗原在局部组织内贮存，通过抗原的缓慢释放，充分延长抗原作用时间，提高免疫应答。一般认为，佐剂的吸附率越高，免疫效果相应也越好，反之吸附率越低，免疫效果则越差。WHO要求白喉和破伤风类毒素疫苗的吸附率不低于80％，但肺炎球菌结合疫苗的吸附率普遍偏低。因此，在现有技术的基础上，进一步提高肺炎球菌结合疫苗的吸附率，对于提高肺炎球菌结合疫苗的免疫效果是很有必要的。

铝佐剂是目前使用最广泛的佐剂之一，也是国内目前批准的唯一可用于人体的佐剂，广泛用于疫苗产品，国内目前的乙型肝炎疫苗，无细胞百白破疫苗等都是含铝佐剂的吸附疫苗。

目前，关于肺炎球菌结合疫苗吸附工艺的报道尚少，现有已公开的肺炎球菌结合疫苗铝佐剂吸附工艺是将13种肺炎球菌荚膜多糖-蛋白结合物混合后直接加入铝佐剂进行吸附，该方法易造成少数血清型吸附率较低，影响免疫效果。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种制备多价肺炎球菌荚膜多糖结合疫苗的新方法。

为了实现本发明目的，本发明的技术方案如下：

第一方面，本发明提供了一种多价疫苗的制备方法，根据抗原的吸附率，由低到高将其与佐剂进行有先后顺序的分步吸附。

具体而言，本发明提供了一种多价肺炎球菌荚膜多糖结合疫苗的制备方法，相应的，在肺炎球菌荚膜多糖-蛋白结合物与佐剂进行吸附的过程中：先将吸附率较低的血清型肺炎球菌荚膜多糖-蛋白结合物与铝佐剂进行吸附，再将其他血清型肺炎球菌荚膜多糖-蛋白结合物与铝佐剂进行吸附。

需要说明的是，所述“吸附率较低”为一种相对概念，即根据所要制备的多价疫苗中各单价血清型肺炎球菌荚膜多糖-蛋白结合物原液与铝佐剂的吸附率，选择吸附率相对较低的单价血清型肺炎球菌荚膜多糖-蛋白结合物原液优先与铝佐剂进行吸附。

所述制备方法主要包括以下步骤：基于配制的终体积，先加入氯化钠和聚山梨酯80，之后再加入铝佐剂，根据不同血清型肺炎球菌荚膜多糖-蛋白结合物原液与铝佐剂的吸附率，将吸附率较低的血清型优先进行吸附，再对其它血清型结合物进行吸附，最后加入琥珀酸提高溶液缓冲能力。

更为具体地，所述制备方法包括如下顺序的步骤：

S1、向配置容器中加入所需体积的0.15mol/L氯化钠溶液；

S2、向氯化钠溶液中加入0.5～2％聚山梨酯80得到溶液1，使聚山梨酯80的终浓度为0.005-0.02％；

S3、向溶液1中加入浓度为1～2mg/mL的铝佐剂溶液得到溶液2，充分搅拌5-10分钟，使铝佐剂的终浓度为0.1～0.25mg/mL；

S4、向溶液2中先加入吸附率较低的血清型肺炎球菌荚膜多糖-蛋白结合物，吸附30～120分钟后，再加入其他血清型肺炎球菌荚膜多糖-蛋白结合物，继续吸附16～24小时，得到溶液3；