[发明专利]牛病毒性腹泻病毒E2蛋白亚单位疫苗组合物及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种牛病毒性腹泻病毒E2蛋白亚单位疫苗组合物及其制备方法和应用，属于动物疫苗与兽用生物制品技术领域。

背景技术

牛病毒性腹泻(Bovine viral diarrhea,BVD)又称牛黏膜病(Mucosal diaease,MD)是由病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)引起的，临床表现为腹泻、高热、繁殖障碍、免疫抑制、持续性感染和严重的黏膜发炎，糜烂、坏死为特征的疾病。BVDV属于黄病毒科瘟病毒属。该病最早于1946年发现于美国，后呈爆发式全球流行。在美国、英国、德国、瑞士、澳大利亚、印度、日本等多个养牛大国广泛流行传播。1983年我国首次有报道该病发生，目前在全国已有20多个省、市、自治区存在BVD。2008年，中华人民共和国农业部发布第96号公告，将牛病毒性腹泻定义为三类疫病；世界动物卫生组织也将该病列为法定报告的动物疫病及动物胚胎交流病原名录三类疫病。该病流行范围很广，除牛外，还能感染羊、骆驼、鹿和袋鼠，甚至还有感染人的报道。BVDV主要通过消化道和呼吸道感染动物，既能水平传播也能垂直传播，大多数呈持续性感染(PI)，且免疫抑制容易继发感染黏膜病，死亡率高达100％。这给全世界的养牛业造成了严重的经济损失。

BVDV基因组为单股正链RNA，全长约12.5Kb，仅含有一个能编码约4000个氨基酸多聚蛋白的ORF，多聚蛋白经翻译和加工后，可形成11种成熟的蛋白，其中C、Erns、E1、E2是病毒的结构蛋白。E2是BVDV的囊膜蛋白，免疫原性最强，能同时诱导机体产生体液免疫和细胞免疫，并产生中和抗体，因此是制备检测抗原和疫苗的首选基因。

BVDV只有一种血清型，其与猪瘟病毒和羊边界病毒同属黄病毒科瘟病毒属，三者有较高的同源性，血清学有交叉反应。根据基因组5’-UTR、E2等区段的不同，分为BVDV-1型和BVDV-2型。2001年vileek(et al.,Bovine viral diarrhoea virus genotype 1 can be separated into at least eleven genetic groups.Archives of virology,2001.146(1):p.99-115)等根据5’-UTR和Npro(P20)基因的核苷酸序列又将BVDV-1型分为11个亚群，BVDV-1a-1j群和鹿群，其中BVDV-1a和BVDV-1b已经遍布北美和欧洲。我国关于BVDV分子流行病学、基因分析以及系统发育分析的研究相对较少。王新平等将分离得到的毒株归为BVDV-1a亚型和BVDV-1b亚型；任敏从新疆、青海和山东的病料中分离出BVDV-2型病毒。即在我国，存在BVDV-1a亚型、1b亚型和BVDV-2型病毒的感染。但是，目前未见有关一种亚型的牛病毒性腹泻病毒或其E2蛋白能够交叉保护其他分型的病毒感染。且本实验室使用DNAstar软件分析BVDV E2蛋白序列，结果显示，BVDV E2蛋白各亚型之间序列差异较大，同源性不高，详细结果如附图1所示。因此，研究一种能够同时保护不同亚型的牛病毒性腹泻病毒感染的疫苗是目前研究的一个方向和重点。

本发明提供了一种能够同时保护牛免受不同分型的牛病毒性腹泻病毒感染的亚单位疫苗的组合物。该组合物能够保护牛免受不同分型的牛病毒性腹泻病毒的感染，且该组合物制备简单、使用量小。这对我国乃至世界范围内牛病毒性腹泻病毒的预防控制可以发挥重要作用。

发明内容

本发明要解决的技术问题是牛病毒性腹泻病毒不同亚型毒株之间的交叉保护差，一种亚型的疫苗不能同时保护牛免受不同亚型毒株的感染

本发明提供了一种能够同时保护牛免受不同亚型的牛病毒性腹泻病毒感染的亚单位疫苗的组合物。该组合物包括两种亚型以上牛病毒性腹泻病毒E2蛋白和药学上可以接受的佐剂。

本发明的技术方案中，优选的，所述不同亚型的牛病毒性腹泻病毒E2蛋白选自BVDV GS5 1a型-E2、BVDV JL-1 1b型-E2和BVDV XJ-04 2型-E2中的至少一种。

本发明的技术方案中，优选的，所述组合物还含有免疫增强剂。

本发明的技术方案中，优选的，所述组合物还含有防腐剂。

本发明的技术方案中，优选的，所述不同亚型的牛病毒性腹泻病毒E2蛋白按照等质量比混合。

本发明的技术方案中，优选的，所述不同亚型的牛病毒性腹泻病毒E2蛋白混合后蛋白总浓度为50μg/头份～200μg/头份。