[发明专利]一种表达藻蓝胆素的基因工程菌株及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种表达藻蓝胆素的基因工程菌株H(314)P(314)，其特征在于：其分类命名为大肠埃希氏菌 Escherichia coli，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为CGMCC No.12909。

2.根据权利要求1所述的表达藻蓝胆素的基因工程菌株H(314)P(314)，其特征在于：所述菌株H(314)P(314)含有如序列表SEQ ID No：1序列所示的hoxⅠ基因。

3.根据权利要求2所述的表达藻蓝胆素的基因工程菌株H(314)P(314)，其特征在于：所述hoxⅠ基因来源于节旋藻Arthrospira platensis FACHB314。

4.根据权利要求1所述的表达藻蓝胆素的基因工程菌株H(314)P(314)，其特征在于：所述菌株H(314)P(314)含有如序列表SEQ ID No：3序列所示的pcyA基因。

5.根据权利要求4所述的表达藻蓝胆素的基因工程菌株H(314)P(314)，其特征在于：所述pcyA基因来源于节旋藻Arthrospira platensis FACHB314。

6.根据权利要求1所述的表达藻蓝胆素的基因工程菌株H(314)P(314)，其特征在于：所述菌株H(314)P(314)经IPTG诱导表达呈现蓝绿色，在580-590nm激发波长下，在635-645nm处发射荧光。

7.权利要求1所述的表达藻蓝胆素的基因工程菌株H(314)P(314)的构建方法，其特征在于所述构建方法包括以下步骤：

（1）克隆节旋藻Arthrospira platensis FACHB314的hoxⅠ基因和pcyA基因，并将其连入克隆载体pMD19-T中，分别获得质粒pMD19T-hoxⅠ(314)和pMD19T-pcyA(314)；

（2）将所述质粒pMD19T-hoxⅠ(314)用BamHI和SacI进行双酶切，所述质粒pMD19T-pcyA(314)用SacⅠ和SalⅠ进行双酶切，回收目的片段hoxⅠ(314)基因和pcyA(314)基因，并将二者连接入pET24a(+)表达载体中，构建出重组表达质粒pET24a-hoxⅠ(314)-pcyA(314)；

（3）将所述质粒pET24a-hoxⅠ(314)-pcyA(314)转化入E.coliBL21(DE3)表达菌株，得到重组基因工程菌株H(314)P(314)。

8.权利要求1所述的表达藻蓝胆素的基因工程菌株H(314)P(314)在用于制备藻蓝胆素中的应用。

9.根据权利要求8所述的表达藻蓝胆素的基因工程菌株H(314)P(314)在用于制备藻蓝胆素中的应用，其特征在于：将含藻蓝蛋白α与β亚基基因及色基裂合酶cpcE与cpcF基因的质粒载体pACYCDuet-uBAEF转化入所述重组基因工程菌株H(314)P(314)，获得重组表达菌株H(314)P(314)BAEF。

10.根据权利要求9所述的表达藻蓝胆素的基因工程菌株H(314)P(314)在用于制备藻蓝胆素中的应用，其特征在于：所述重组表达菌株H(314)P(314)BAEF的重组藻蓝蛋白表达量达1.08 mg/ml以上，获得的此重组藻蓝蛋白在580nm激发波长下，在640nm处发射出藻蓝蛋白的特征荧光峰，且单位质量重组藻蓝蛋白发射出的荧光强度达140000。