[发明专利]一种硬脑膜补片、制备方法及在硬脑膜损伤修复中的应用

权利要求书

1.一种脱细胞异体真皮基质的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一，将异体皮原料投入盛有交联剂溶液的容器中，浸泡；

步骤二，将浸泡原料取出，投入盛有生理盐水溶液容器中浸泡，得半成品A；

步骤三，将半成品A投入盛有蛋白酶溶液的容器中，浸泡振荡处理，得半成品B；

步骤四，将半成品B投入盛有含有表面活性剂和高渗盐溶液的容器中，超声浸泡处理；更换表面活性剂和高渗盐溶液，超声浸泡处理；重复该操作多次，得半成品C；

步骤五，将半成品C用生理盐水浸泡，振荡处理，得半成品D；

步骤六，将半成品D投入盛有DNA水解酶溶液的容器中，浸泡处理，得半成品E；

步骤七，将半成品E用生理盐水浸泡振荡处理，得半成品F；

步骤八，将半成品F取出，用氨基酸溶液浸泡后，投入盛有生理盐水溶液容器中，静置，得半成品G；

步骤九，将半成品G取出，置于冷冻干燥机内进行冷冻干燥，得半成品H；

步骤十，将半成品H取出，包装，灭菌，得成品I；

其中交联剂溶液的配方是用京尼平与选自戊二醛、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺、N-羟基丁二酰亚胺、一水吗啉乙磺酸任一作为交联剂，其中，京尼平与另一交联剂的质量比为1-6:1，交联剂与异体皮原料质量比为0.1-4:1；

所述蛋白酶溶液为0.1-0.3w/v％胰蛋白酶-dispase酶溶液，其中，胰蛋白酶与dispase酶的质量比是2-3:0.1-1.8，溶液pH值为7.0-8.0；或所述蛋白酶溶液为0.1-0.4w/v％胰蛋白酶-木瓜蛋白酶溶液，其中，胰蛋白酶与木瓜蛋白酶的质量比为2-3:0.1-1.8，溶液pH值为6.0-8.0；或所述蛋白酶溶液为0.1-0.3w/v％胰蛋白酶-菠萝蛋白酶溶液，其中，胰蛋白酶与菠萝蛋白酶的质量比为2-3:0.1-1.8，溶液pH值为7.0-8.0；

其中表面活性剂和高渗盐溶液的配方是含有0.1-0.3g/L聚乙二醇与SDS，或含有0.1-0.3g/L聚乙二醇与Triton X-100的高渗盐溶液，其中，聚乙二醇选择分子量400-2000，聚乙二醇与SDS或Triton X-100的质量比为40-60:60-40，高渗盐为50mM tris-HCl，1M氯化钠，10mM EDTA；

其中DNA水解酶溶液的配方是DNA水解酶浓度为2-10g/L，pH7.0-8.0；

其中氨基酸溶液的浓度为0.5-2g/L；由甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸、谷氨酸按照3-4:1.1-1.3:1.0-1.6:0.96-1.16:0.07-0.08质量比配制；

其中步骤一中浸泡时间为3-6h；

其中步骤二中浸泡时间为8小时，浸泡次数为6-9次，浸泡温度为5-10℃；

其中步骤三中的浸泡振荡为浸泡3-6小时，振荡转速为50-200rpm，重复操作1-3次；

步骤四中的超声浸泡条件为：30-60KHz，100-400W，超声5-10分钟，浸泡2-4小时，重复2-4次；

步骤五中的振荡处理条件为振荡2小时，更换生理盐水，继续振荡处理，重复该操作4-6次；

其中步骤七的条件为生理盐水浸泡10-12小时，振荡处理；更换生理盐水，振荡处理，重复该操作2-4次；

步骤五、七中振荡转速为50-200rpm；

其中步骤九的冷冻干燥步骤具体为将半成品G在零下20℃至零下40℃条件下，真空度不高于10Pa条件下，真空干燥20-60h；

所述真皮基质来源于自愿捐献者的皮肤、羊膜。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述脱细胞异体真皮基质的顶破强度≥20kPa、缝合强度≥18N、拉伸强度为4.0MPa-6.5MPa、拉伸伸长率为10％-15％。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，胰蛋白酶与dispase酶的质量比是2:1。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，聚乙二醇与SDS或与Triton X-100的质量比为50-60:50-40。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，DNA水解酶浓度为3-8g/L。