[发明专利]提高罗汉果中角鲨烯含量的方法

说明书

本发明公开了一种提高罗汉果中角鲨烯含量的方法，包括以下步骤：S1、将罗汉果外植体在含有茉莉酸甲酯的固体培养基中进行组织培养后得到罗汉果苗；S2、栽培罗汉果苗，期间将50～400μmol/L的茉莉酸甲酯溶液喷洒于授粉10～20d后的罗汉果苗的表面至表面滴水。本发明通过在罗汉果组织培养和栽培过程中施加茉莉酸甲酯，以诱导罗汉果角鲨烯代谢关键酶基因的高表达，从而在短期内快速提高罗汉果角鲨烯的含量。

技术领域

本发明涉及植物生物技术领域。更具体地说，本发明涉及一种提高罗汉果中角鲨烯含量的方法。

背景技术

罗汉果(Siraitia grosvenorii)为中国特有的珍贵药用和甜料植物。其果实性凉、味甘，具有清热润肺，利咽开音，滑肠通便和抗癌等功效，活性成分甜苷V为世界上最强的非糖甜味物质之一，是蔗糖甜度的300-400倍，广泛应用于食品、保健品和药品中，是糖尿病人、肥胖者和高血压患者的理想糖替代品。研究发现，角鲨烯是甜苷V生物合成的中间产物，在罗汉果果实发育后期，角鲨烯被完全消耗殆尽转化成甜苷V，然而，角鲨烯只存在占果重不足15％的果肉内，且含量极低，严重制约了罗汉果产业的健康发展。

茉莉酸甲酯作为植物信号诱导子能够安全有效地激发植物次生代谢物的产生和积累。因此，优选合适的茉莉酸甲酯施用时间和浓度，可以最大限度地提高药用植物活性成分的含量，因此期望寻找一种能通过使用茉莉酸甲酯提高罗汉果中角鲨烯含量的方法。

发明内容

本发明的一个目的是解决上述问题，并提供后面将说明的优点。

本发明还有一个目的是提供一种提高罗汉果中角鲨烯含量的方法，通过在罗汉果组织培养和栽培过程中施加茉莉酸甲酯，能诱导罗汉果角鲨烯代谢关键酶基因的高表达，从而在短期内快速提高罗汉果角鲨烯的含量。

为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种提高罗汉果中角鲨烯含量的方法，包括以下步骤：

S1、将罗汉果外植体在含有茉莉酸甲酯的固体培养基中进行组织培养后得到罗汉果苗；

S2、栽培罗汉果苗，期间将50～400μmol/L的茉莉酸甲酯溶液喷洒于授粉10～20d后的罗汉果苗的表面至表面滴水。

优选的是，步骤S1中，在含有茉莉酸甲酯的固体培养基中的培养条件为相对湿度60～66％、光照强度1400lux、光照时间8h/d，在温度为21～25℃下培养30d。

优选的是，步骤S1中，所述固体培养基是将0.22μm的微孔滤膜灭菌后的茉莉酸甲酯母液添加到固体培养基中，对固体培养基灭菌并冷却至24～26℃；

所述茉莉酸甲酯母液为用质量分数为2％的乙醇溶解茉莉酸甲酯，配制成茉莉酸甲酯浓度为50mmol/L的茉莉酸甲酯母液。

优选的是，步骤S2中，将所述茉莉酸甲酯溶液喷洒于罗汉果苗时，早、中、晚各喷洒一次，连续喷施10d。

优选的是，步骤S1中固体培养基中包括步骤S1中固体培养基中包括MS、1.5mg/L6-苄氨基腺嘌呤、0.3mg/L吲哚丁酸、3.5g/L琼脂、30g/L蔗糖、50～400μmol/L茉莉酸甲酯以及1.0g/L活性炭。

优选的是，步骤S1中固体培养基中还包括0.05mg/L多胺和0.005mg/L生物活性肽。

优选的是，步骤S1中罗汉果外植体为剪取约40～55cm的罗汉果嫩梢，用无菌水冲洗后用体积分数为50％的异丙醇溶液冲淋，然后浸入质量分数为0.01％的过氧化氢溶液中2min，取出后再用无菌水冲洗干净，切取0.5～1mm的茎尖分生组织后得到。