[发明专利]一种可溶性水通道蛋白AqpZ融合载体及其构建方法

权利要求书

1.一种可溶性水通道蛋白AqpZ融合载体，其特征在于，所述的融合载体为利用PCR扩增pMBP-p质粒，得到除去N端信号肽的麦芽糖结合蛋白cDNA即ΔMBP，将ΔMBP整合到pET28a质粒中得到pET28a-ΔMBP载体；PCR扩增pET28a-ApoAI质粒，得到截短的人类载脂蛋白cDNA即ApoAI*，将ApoAI*整合到pET28a-ΔMBP载体中得到pET28a-ΔMBP-ApoAI*-His载体；PCR扩增大肠杆菌基因组DNA，得到水通道蛋白AqpZ的cDNA即AqpZ，将AqpZ整合到pET28a-ΔMBP-ApoAI*-His载体中得到pET28a-ΔMBP-AqpZ-ApoAI*-His载体。

2.根据权利要求1所述的可溶性水通道蛋白AqpZ融合载体的构建方法，其特征在于，具体步骤如下：

步骤1，先将pMBP-p质粒进行PCR，得到除去N端信号肽的麦芽糖结合蛋白cDNA即ΔMBP，用NcoⅠ限制性核酸内切酶和NdeⅠ限制性核酸内切酶对ΔMBP和pET28a质粒进行酶切，连接反应得到pET28a-ΔMBP载体；

步骤2，将pET28a-ApoAI质粒进行PCR，得到截短的人类载脂蛋白cDNA即ApoAI*，用HindⅢ限制性核酸内切酶和NotⅠ限制性核酸内切酶对ApoAI*和pET28a-ΔMBP质粒进行酶切，在ApoAI*末端无终止子的情况下，引入pET28a本身所带的His标签，连接反应得到pET28a-ΔMBP-ApoAI*-His载体；

步骤3，对大肠杆菌基因组DNA进行PCR反应，得到水通道蛋白AqpZ的cDNA即AqpZ，用NdeⅠ限制性核酸内切酶和HindⅢ限制性核酸内切酶对AqpZ和pET28a-ΔMBP-ApoAI*-His质粒进行酶切，连接反应得到pET28a-ΔMBP-AqpZ-ApoAI*-His载体。