[发明专利]抗菌肽融合蛋白及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种抗菌肽融合蛋白，其特征在于：该蛋白包括抗菌肽天蚕素cecropin蛋白、orf-86鲨肝肽蛋白，所述抗菌肽天蚕素cecropin蛋白与orf-86鲨肝肽蛋白之间通过3GSA柔性肽片段连接，所述抗菌肽天蚕素cecropin蛋白氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述orf-86鲨肝肽蛋白氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述3GSA柔性肽片段如SEQ ID NO.3所示。

2.根据权利要求1所述的抗菌肽融合蛋白，其特征在于：该蛋白是抗菌肽天蚕素cecropin蛋白编码基因、orf-86鲨肝肽编码基因、以及位于抗菌肽天蚕素cecropin蛋白编码基因与orf-86鲨肝肽编码基因之间的3GSA柔性肽编码基因在基因水平融合后在原核表达的可溶性重组蛋白。

3.权利要求1所述的抗菌肽融合蛋白的编码基因，其特征在于：其核酸序列如SEQ ID NO.4所示。

4.权利要求1所述的抗菌肽融合蛋白的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)采用人工合成的方法获得包含抗菌肽天蚕素cecropin蛋白编码基因序列、3GSA柔性肽编码基因序列、orf-86鲨肝肽编码基因的orf-86融合基因序列，如SEQ ID NO.4所示；

(2)以pET-Duet-His-Sumo质粒为载体，构建重组质粒，并转化至大肠杆菌E.coli TG1中，通过鉴定、筛选，得到阳性克隆；

(3)将阳性克隆转化至大肠杆菌宿主菌BL21中，通过氨苄青霉素抗生素的筛选获得表达菌株；

(4)挑取阳性单克隆至LB培养基，LB培养基中含氨苄青霉素，培养至OD₆₀₀为0.5～0.6，加入IPTG16℃培养18～20h进行蛋白诱导，得到在上清表达的带Sumo标签的融合蛋白；

(5)对得到的带Sumo标签的融合蛋白进行超滤浓缩，然后切除Sumo标签，得到抗菌肽融合蛋白。

5.根据权利要求4所述的抗菌肽融合蛋白的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中阳性单克隆培养至OD₆₀₀为0.6，加入IPTG16℃培养20h进行蛋白诱导。

6.权利要求1所述的抗菌肽融合蛋白在制备抗菌药物中的应用。

7.权利要求3所述的抗菌肽融合蛋白的编码基因在制备抗菌药物中的应用。