[发明专利]一种助表达基因片段及其无细胞表达ADCY2蛋白系统有效
| 申请号： | 201611259553.4 | 申请日： | 2016-12-30 |
| 公开（公告）号： | CN106632648B | 公开（公告）日： | 2020-04-17 |
| 发明（设计）人： | 华权高;沈鹤霄;马峰;罗绍祥;肖颖;舒芹;徐春雷;王静;邓陈玲;易汪雪;李昆鹏 | 申请（专利权）人： | 武汉金开瑞生物工程有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/47 | 分类号： | C07K14/47;C12N9/88;C12N15/70 |
| 代理公司： | 武汉智嘉联合知识产权代理事务所(普通合伙) 42231 | 代理人： | 黄君军 |
| 地址： | 430000 湖北省武汉市东湖开发区*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 表达 基因 片段 及其 细胞 adcy2 蛋白 系统 | ||
1.一种助表达基因片段，其特征在于：所述助表达基因片段所编码的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO.1所示。
2.一种含有如权利要求1所述的助表达基因片段的无细胞表达ADCY2蛋白系统，其特征在于：所述无细胞表达ADCY2蛋白系统包括如下成分：HEPES-KOH缓冲液、ATP、GTP、UTP、CTP、cAMP、谷氨酸钾、醋酸铵、醋酸镁、亚叶酸、T7 RNA聚合酶、氨基酸、PET8000、磷酸烯醇式丙酮酸、大肠杆菌抽提物；将含助表达基因片段的表达质粒加入无细胞表达ADCY2蛋白系统中进行表达；所述含助表达基因片段的表达质粒的构建是通过SOE-PCR方法以及平端连接方法在ADCY2基因密码子优化后的片段的N端连接助表达序列的基因片段、C端连接组氨酸标签。
3.如权利要求2所述的含有助表达基因片段的无细胞表达ADCY2蛋白系统，其特征在于：所述表达质粒是由将待表达的ADCY2蛋白基因进行密码子优化后与助表达序列的基因和组氨酸标签进行连接，设计引物并引入双酶切位点，将连接得到的目的片段克隆到含T7启动子的表达载体pET28a上获得。
4.如权利要求3所述的含有助表达基因片段的无细胞表达ADCY2蛋白系统，其特征在于：所述ADCY2基因进行密码子优化后的序列如序列表2所示。
5.如权利要求4所述的含有助表达基因片段的无细胞表达ADCY2蛋白系统，其特征在于：通过SOE-PCR方法以及平端连接方法在ADCY2基因密码子优化后的片段的N端连接助表达序列的基因片段、C端连接组氨酸标签。
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