[发明专利]一种从多种混合DNA中超灵敏检测痕量DNA的方法和试剂有效
| 申请号： | 201611260467.5 | 申请日： | 2016-12-30 |
| 公开（公告）号： | CN106755443B | 公开（公告）日： | 2018-11-30 |
| 发明（设计）人： | 王永利;宋卓;袁梦兮 | 申请（专利权）人： | 人和未来生物科技（长沙）有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6858 | 分类号： | C12Q1/6858 |
| 代理公司： | 深圳鼎合诚知识产权代理有限公司 44281 | 代理人： | 孙银行;彭家恩 |
| 地址： | 410000 湖南省长沙市高新*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 探针 超灵敏检测 待检测区域 特异性富集 特异性引物 接头连接 通用引物 痕量DNA 混合DNA 预富集 位点 双链寡核苷酸 检测灵敏度 通用引物对 复杂样本 检测技术 结合位点 目标DNA 外源DNA 检测 扩增 上游 污染 | ||
1.一种从多种混合DNA中超灵敏检测痕量DNA的方法，其特征在于，所述方法包括：
（a）使用探针对含有待检测位点或待检测区域的目标DNA的接头连接产物进行探针预富集，其中所述探针是通过PCR扩增得到的一对或多对覆盖待检测位点或待检测区域的双链寡核苷酸，所述接头连接产物的两端的接头均包括通用引物的结合位点；
（b）使用针对所述待检测位点或待检测区域的上游特异性引物和下游特异性引物，以及两端的通用引物对探针预富集产物进行特异性富集，再对特异性富集产物进行通用引物扩增；以及
（c）对所述步骤（b）的扩增产物进行测序，以检测所述待检测位点或待检测区域。
2.根据权利要求1所述的从多种混合DNA中超灵敏检测痕量DNA的方法，其特征在于，所述探针带有亲和标记。
3.根据权利要求2所述的从多种混合DNA中超灵敏检测痕量DNA的方法，其特征在于，所述亲和标记是位于所述探针两条链的5’端的生物素标记。
4.根据权利要求1所述的从多种混合DNA中超灵敏检测痕量DNA的方法，其特征在于，所述步骤（b）使用多条所述上游特异性引物组成的引物组和多条所述下游特异性引物组成的引物组。
5.根据权利要求1所述的从多种混合DNA中超灵敏检测痕量DNA的方法，其特征在于，所述探针长度为150-200bp。
6.根据权利要求1所述的从多种混合DNA中超灵敏检测痕量DNA的方法，其特征在于，每一个所述上游特异性引物和下游特异性引物距离所述待检测位点或待检测区域的距离为1-20个碱基。
7.根据权利要求1所述的从多种混合DNA中超灵敏检测痕量DNA的方法，其特征在于，每一个所述上游特异性引物和下游特异性引物距离所述待检测位点或待检测区域的距离为1-5个碱基。
8.根据权利要求1所述的从多种混合DNA中超灵敏检测痕量DNA的方法，其特征在于，所述待检测位点或待检测区域包括点突变、插入、缺失和基因融合中的至少一种。
9.一种从多种混合DNA中超灵敏检测痕量DNA的试剂，其特征在于，所述试剂包括：
（a）探针，所述探针是通过PCR扩增得到的一对或多对覆盖待检测位点或待检测区域的双链寡核苷酸，用于对含有待检测位点或待检测区域的目标DNA的接头连接产物进行探针预富集，其中，所述接头连接产物的两端的接头均包括通用引物的结合位点；
（b）上游特异性引物和下游特异性引物，以及通用引物，用于对探针预富集产物进行特异性富集，以及对特异性富集产物进行通用引物扩增。
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