[发明专利]岩黄连愈伤组织高效诱导方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物组织培养领域。更具体地说，本发明涉及一种岩黄连愈伤组织高效诱导方法。

背景技术

岩黄连,为罂粟科植物岩黄连(Euphorbia pekinensis Rupr.)，多年生常绿草本，根为圆柱状，长20-30厘米，花期5-8月，果期6-9月。岩黄连广布于全国(除台湾、云南、西藏和新疆)，北方尤为普遍，生于山坡、灌丛、路旁、荒地、草丛、林缘和疏林内。岩黄连根可入药，具有较高的药用价值，具有逐水通便，消肿散结，主治水肿，并有通经之效，用于治疗慢性肾炎，治疗晚期血吸虫病腹水或其他肝硬变腹水等症。近年来其资源遭到了严重破坏，且对生长环境要求苛刻，随着市场需求量的不断增加，野生岩黄连资源濒临枯竭了，生产上难以实现大面积栽培。如何保护野生岩黄连资源并让其大量繁殖是目前急需解决的问题。

发明内容

本发明的一个目的是解决野生岩黄连难以大面积繁殖的问题，并提供至少后面将说明的优点。

为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种岩黄连愈伤组织高效诱导方法，取岩黄连外植体经洗净消毒后接种至诱导培养基中诱导培养10-15天得到愈伤组织，所述诱导培养基是以B5培养基为基本培养基，还加入6-苄基腺嘌呤0.5-1.5mg/L、2,4-二氯苯氧乙酸0.5-1.5mg/L、维生素C 5-20mg/L、活性炭0.1-0.3g/L、蔗糖20-30g/L以及琼脂3.8-4.5g/L，所述诱导培养基的pH值为6.0。

优选的是，将所述愈伤组织接种至增殖培养基中进行增殖培养，所述增殖培养基是以B5培养基为基本培养基，还添加6-苄基腺嘌呤0.1-1.0mg/L、2,4-二氯苯氧乙酸0.2-1.0mg/L、维生素C5-20mg/L、活性炭0.1-0.3g/L、蔗糖20-30g/L以及琼脂3.8-4.5g/L，所述增殖培养基的pH值为5.8。

优选的是，所述诱导培养的具体步骤为：将消毒后的所述岩黄连外植体放于温度为23-26℃下，先暗培养1周后，再置于的光照时间为10-12h/d，光照强度1400-2000lux 的条件下培养3-8天。

优选的是，所述增殖培养的条件为：培养温度25±2℃，光照强度1400-2000lux，光照强度为10-12h/d。

优选的是，所述岩黄连外植体洗净消毒方法为：取岩黄连外植体依次用2％清洗剂水溶液浸泡5-10min、线状自来水冲洗5-15min、质量浓度为75％乙醇表面消毒30-45s、质量浓度为0.1％HgCl₂消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸吸去表面水分，备用。

优选的是，所述岩黄连外植体为叶片、叶柄，茎中的一种。

优选的是，所述诱导培养基中还加入有水杨酸0.59-0.88mg/L、茉莉酸甲酯0.42-0.79mg/L、精氨酸0.4-1g/L、L-半胱氨酸0.2-0.8g/L以及赖氨酸0.1-0.6g/L。

优选的是，所述增殖培养基中还加入油菜素内酯0.04-0.08mg/L、硼氢化钾7-12mg/L、硫酸亚铁3-6mg/L以及叶酸0.4-0.8mg/L。

本发明至少包括以下有益效果：

(1)6-苄基腺嘌呤一般在诱导培养基中诱导外植体出芽，本发明加入2,4-二氯苯氧乙酸，可以协同6-苄基腺嘌呤加快出芽速度，在愈伤组织增殖过程中，一般用2,4-二氯苯氧乙酸诱导增殖，本发明在增殖培养基中加入6-苄基腺嘌呤，协同2,4-二氯苯氧乙酸诱导愈伤组织快速增殖，本发明可以高效诱导出愈伤组织且能使得愈伤组织快速增殖，从而解决野生岩黄连难以大面积繁殖的问题；

(2)本发明在诱导培养基和增殖培养基中均加入VC，可以防止外植体出芽和愈伤组织发生褐化；

(3)本发明在诱导培养基中加入水杨酸，水杨酸不但可以起到杀菌的作用还能促进芽的生长，茉莉酸甲酯可促进外植体在诱导过程中基因的表达，进而加快诱导过程，精氨酸、L-半胱氨酸以及赖氨酸的加入不但为外植体在诱导过程中提供了营养，而且精氨酸可以促进外植体细胞分裂，L-半胱氨酸是一种还原剂，可以进一步防止组织褐化，赖氨酸能够促进芽的生长发育，加快愈伤组织的形成；