[发明专利]一种克罗诺阪崎肠杆菌的实时荧光核酸恒温扩增检测试剂盒

权利要求书

1.一种克罗诺阪崎肠杆菌的实时荧光核酸恒温扩增检测试剂盒，包含有一条可与如序列表中序列1所示的克罗诺阪崎肠杆菌的靶标核酸RNA序列特异结合的捕获探针，一对用于在M-MLV反转录酶作用下产生靶标核酸的DNA拷贝的扩增引物T7和nT7，和一条用于与在T7RNA聚合酶作用下根据所述靶标核酸的DNA拷贝产生的RNA拷贝特异结合的检测探针；其特征在于，所述捕获探针的核苷酸序列如序列表中序列2所示；所述扩增引物由T7引物和nT7引物组成，T7引物序列如序列表中序列3所示，nT7引物序列如序列表中序列4所示；所述检测探针的核苷酸序列如序列表中序列5所示，5’端标记FAM荧光基团，3’端标记DABCYL淬灭基团。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包含SAT酶液，所述SAT酶液为包含M-MLV反转录酶和T7 RNA聚合酶的混合物，所述捕获探针存在于一核酸提取液中，所述T7引物、nT7引物和检测探针存在于检测液中。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包含有内标和内标检测探针；所述内标为竞争性内标，可与靶标核苷酸RNA使用同一对引物即T7和nT7，内标由序列表中序列7所示的含内标RNA，所述内标检测探针的核苷酸序列如序列表中序列6所示，5’端标记HEX荧光基团，3’端标记DABCYL淬灭基团，且所述内标检测探针存在于检测液中。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包含裂解液、核酸提取液、洗涤液、反应液、检测液、SAT酶液、阳性对照、阴性对照和内标，其中：

裂解液：含硫酸铵(NH₄)₂SO₄和HEPES；

核酸提取液：含捕获探针和磁珠；

洗涤液：含NaCl和SDS；

反应液：含dNTP和NTP；

检测液：含T7引物、nT7引物、检测探针和内标检测探针；

SAT酶液：含M-MLV反转录酶、T7 RNA聚合酶；

阳性对照；含克罗诺阪崎肠杆菌基因的体外转录RNA稀释物；

阴性对照：不含有克罗诺阪崎肠杆菌靶标核酸序列或不含有克罗诺阪崎肠杆菌的溶液；

内标：含内标RNA即序列如序列表中序列7所示的稀释物。