[发明专利]一种肝素修饰的阳离子脂质体及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及药物制剂领域，具体涉及一种肝素修饰的阳离子脂质体，本发明还公开了这种肝素修饰的阳离子脂质体的制备方法。

背景技术

阳离子脂质体具有无免疫原性、可生物降解、可重复转染等特性，一直受到相关研究者的重视，至今已有数十种阳离子脂质体被研制出来。但研究表明，单独使用阳离子脂质体具有一定的风险。实验动物静脉注射给予阳离子脂质体后，倾向于与血浆蛋白或血细胞聚合，并通过静电作用附着于血管内皮细胞上，因此导致其从血液中快速消除或定位于肺部，增加肺栓塞的危险。阳离子脂质体的另一个毒性表现为免疫反应，Zelphati等的试验结果显示阳离子脂质可以激活血清中的补体系统，补体系统激活后可以促进补体成分与脂质体的结合，因而会被肺部或肝脏补体成分受体所识别，导致阳离子脂质体快速地从血流中清除而被肺或肝脏所摄取。采用亲水性的材料结合阳离子脂质体，对阳离子脂质体实施保护，可以大大降低阳离子脂质体引起的体内安全性风险。

肝素是一种酸性的粘多糖，极易溶于水。肝素作为理想的阳离子脂质体修饰材料的优势主要集中体现在两个方面：首先，肝素可以代替PEG作为药物载体的亲水性修饰材料，用于构建胶束、脂质体等。亲水性材料PEG常用于载体修饰，以达到长循环的目的。但是，PEG修饰的载体在体内中也存有诸多弊端和一些不能忽视的问题，如静脉重复注射PEG化脂质体可加速血液清除，从而大大限制了其临床应用。肝素作为修饰材料，具有类PEG化的作用，修饰后的载体表现出更为出色的稳定性、安全性。其次，有研究表明肝素或肝素类似物可以通过成纤维细胞生长因子受体内吞进入肿瘤和肿瘤内皮细胞。因此，肝素修饰的阳离子载药脂质体可赋予药物载体一定的肿瘤血管内皮细胞和肿瘤细胞靶向性，提高治疗效果。

本发明是在构建阳离子脂质体的基础上，通过共价键连接的方式结合肝素，得到肝素修饰的阳离子脂质体。本发明的肝素修饰的阳离子脂质体，体外稳定性实验证明，肝素修饰的阳离子脂质体能显著提高阳离子脂质体的稳定性。载体溶血性实验证明，修饰肝素后，阳离子脂质体的安全性得到提高。

发明内容

本发明的肝素修饰的阳离子脂质体，含下列组分及重量比：

本发明的肝素修饰的阳离子脂质体的制备方法包括：将蛋黄卵磷脂、胆固醇、阳离子材料、药物溶于有机溶剂，减压蒸发去除有机溶剂；活化剂活化肝素，备用；将活化后的肝素溶液加入制备的阳离子脂质体中室温反应过夜；超滤除去游离的肝素，即得肝素修饰的阳离子脂质体混悬液；制备成冻干粉针剂时，将冻干保护剂溶解于脂质体混悬液中，冷冻干燥即可。

上述阳离子材料选自氯化三甲基-2，3-二油烯氧基丙基铵、溴化三甲基-2，3-二油酰氧基丙基铵、三氟乙酸二甲基-2，3-二油烯氧基丙基-2-(2-精胺甲酰氨基)乙基铵、溴化三甲基十二烷基铵、溴化三甲基十四烷基铵、溴化三甲基十六烷基铵、溴化二甲基双十八烷基铵、N-(2-精胺甲酰基)-N’，N’-双十八烷基甘氨酰胺、1，2-二油酰-3-琥珀酰-sn-甘油胆碱酯、3β-[N-(N’，N’-二甲基胺乙基)胺基甲酰基]胆固醇、脂质多聚-L-赖氨酸、硬脂胺中的一种或几种。

上述冻干保护剂选自蔗糖、乳糖、葡萄糖、甘露醇中的一种或几种。

上述药物可以是姜黄素及其衍生物的一种或几种的混合物。

上述有机溶剂选自氯仿、二氯甲烷、乙醚、乙醇、丙酮中的一种或几种，优选二氯甲烷、氯仿。

上述活化剂选自1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐与N-羟基硫代琥珀酰亚胺的混合物，两者比例为1∶2-1∶6。

上述肝素选自普通肝素、达肝素钠、依诺肝素、纳肝素钙、帕肝素钠、汀肝素钠中的一种或几种。

本发明所涉及的比例均为重量比。

当胆固醇取一个固定值，蛋黄卵磷脂取不同的重量时，肝素修饰的阳离子脂质体混悬液的平均粒径和包封率也不同。结果见表1。

表1：药物和蛋黄卵磷脂的比例对脂质体粒径和包封率的影响(n＝3)

从表中可以看出，当药物和蛋黄卵磷脂重量比小于1∶5时，粒径较大，包封率很低；当药物：磷脂重量比大于1∶35时，脂质体溶液的透光性下降，粒径逐渐增大，放置越久越不稳定；当药物和大豆卵磷脂重量比在1∶5～35范围内，包封率较高，粒径符合要求，因此本发明中药物/蛋黄卵磷脂的比例为1∶5～35。

当蛋黄卵磷脂取一个固定值，胆固醇取不同的重量时，肝素修饰的阳离子脂质体混悬液的平均粒径和包封率也不同。结果见表2。