[发明专利]一种人CK18蛋白检测试剂及其制备方法

说明书

本发明涉及一种CK18检测试剂及制备方法，特别是采用乳胶增强免疫比浊法检测CK18的试剂及制备方法，包括试剂R1、试剂R2以及校准品，其中试剂R1包含反应促进剂、防腐剂、表面活性剂、稳定剂、电解质及缓冲液；试剂R2包含结合有抗CK18单克隆抗体和多克隆抗体的胶乳颗粒、防腐剂、表面活性剂、稳定剂、电解质及缓冲液；校准品包含防腐剂、电解质、稳定剂、CK18纯品及缓冲液。本发明采用单克隆抗体和多克隆抗体复合包被胶乳颗粒的方法保证了试剂盒的高灵敏度和宽线性范围，同时还具有准确度高、重复性好、特异性强、操作简单等优点，可用于临床常用的全自动生化分析仪。

技术领域

本发明涉及一种细胞角蛋白18(CK18)检测试剂及制备方法，特别是采用乳胶增强免疫比浊法检测CK18的试剂及制备方法，可应用在检验医学领域。

背景技术

CK18是细胞骨架蛋白的一种，除了起到细胞骨架的支撑作用以外，还通过多种途径参与着细胞内的各种反应。CK18作为肝细胞凋亡的指标，在包括非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的很多肝脏疾病中都有升高，并且与NAFLD患者肝细胞的脂肪变性、小叶炎症、气球样变的程度及纤维化程度相关，同时有中重度纤维化患者的血清CK18水平明显高于轻度或无纤维化患者的水平。

肝病是威胁人类健康的重大问题，脂肪肝、药物性肝损伤、自体免疫性肝病等发病率逐年上升，相当数量的上述肝病患者最终发展为肝纤维化。肝纤维化是所有肝脏慢性疾病的共同通路，早中期可逆转，晚期即肝硬化不可逆转，最终发展为肝功能衰竭危及生命，因此肝纤维化早期诊断意义重大。CK18作为一个无创性的检测手段，在NAFLD的诊断、NAFL和HASH 的鉴别及纤维化程度的判断上有重要临床价值。

对于CK18定量检测，现有的检测方法主要有有双抗夹心法(ELISA)、免疫发光法。ELSA的灵敏度较高，但其操作复杂，反应测定时间长，且线性范围窄，对于样品稀释度不好控制；化学发光法具有灵敏度高的优点，但是需要配套专门仪器使用，价格昂贵，不利于各级医院推广，而且标准曲线会随着时间漂移。

胶乳增强免疫比浊法具有操作简单、快速、灵敏度高、可应用于自动生化分析仪等优点，如能开发出可在全自动生化分析仪上使用的免疫比浊试剂用于检测血清中的CK18，将为临床在NAFLD的诊断及治疗提供强有力的支持。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足和缺点，提供一种具有高灵敏度和宽线性范围的CK18检测试剂，同时还具有测值准确，操作简单、快速可用于门急诊检测且仪器适用面广等优点，所述试剂盒包括试剂R1、试剂R2和校准品，其中：

a)试剂R1包含防腐剂、稳定剂、表面活性剂、反应促进剂、电解质和缓冲液；

b)试剂R2包含结合有抗CK18单克隆抗体和多克隆抗体的胶乳颗粒、防腐剂、稳定剂、表面活性剂、电解质和缓冲液；

c)校准品包含防腐剂、稳定剂、电解质、CK18纯品和缓冲液。

特别地，本发明涉及一种单多抗复合的胶乳增强免疫比浊试剂用于测定血清CK18，包括试剂R1、试剂R2和已知浓度的CK18抗原校准品，其中：

a)本发明所述试剂盒的试剂R1是一种使样本中CK18特异的抗原位点充分暴露，有利于与抗CK18抗体充分结合的，包含占其质量百分比为：0.01％～1.0％防腐剂、0.05％～5.0％的稳定剂、0.01％～3.0％的表面活性剂、0.01％～10.0％的反应促进剂、0.01％～5.0％的电解质、pH 6.5～8.5的10～200mmol/L的缓冲液；