[发明专利]一种制备烟酰胺单核苷酸的方法有效
| 申请号： | 201680003986.5 | 申请日： | 2016-07-30 |
| 公开（公告）号： | CN108026130B | 公开（公告）日： | 2021-04-02 |
| 发明（设计）人： | 傅荣昭;张琦 | 申请（专利权）人： | 邦泰生物工程（深圳）有限公司 |
| 主分类号： | C07H1/00 | 分类号： | C07H1/00;C07H19/00 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 518102 广东省深圳市宝安区西*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 制备 烟酰胺单 核苷酸 方法 | ||
1.一种制备烟酰胺单核苷酸的方法，其特征在于：以烟酰胺、ATP和核糖为原料，在烟酰胺磷酸核糖转移酶、核糖磷酸焦磷酸激酶以及核糖激酶的催化作用下发生反应，制得烟酰胺单核苷酸；所述烟酰胺磷酸核糖转移酶的用量为1-100g/L底物溶液，所述核糖磷酸焦磷酸激酶的用量为1-100g/L底物溶液，所述核糖激酶的用量为1-100g/L底物溶液；所述反应在温度为30-50℃，pH值为6.5-8.5的条件下进行；所述反应在Mg2+和K+存在的条件下进行。
2.根据权利要求1所述的制备烟酰胺单核苷酸的方法，其特征在于：所述反应在Tris-HCl缓冲液中进行。
3.根据权利要求1所述的制备烟酰胺单核苷酸的方法，其特征在于：所述烟酰胺的浓度为1-150mM，所述ATP的浓度为1-50mM，所述核糖的浓度为1-100mM。
4.根据权利要求1所述的制备烟酰胺单核苷酸的方法，其特征在于：所述原料中烟酰胺、ATP、核糖的摩尔比为1-4∶1∶1-4。
5.根据权利要求4所述的制备烟酰胺单核苷酸的方法，其特征在于：所述原料中烟酰胺、ATP、核糖的摩尔比为1.5∶1∶1.5。
6.根据权利要求1至5任一项所述的制备烟酰胺单核苷酸的方法，其特征在于所述烟酰胺磷酸核糖转移酶为如下(a)或(b)的蛋白质：
(a)其氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示的蛋白质，
(b)在(a)限定的氨基酸序列中经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸并且以烟酰胺和PRPP为底物具有比氨基酸序列如SEQID NO：2所示的亲本高的烟酰胺磷酸核糖转移酶催化活性的由(a)衍生的蛋白质。
7.根据权利要求6所述的制备烟酰胺单核苷酸的方法，其特征在于所述烟酰胺磷酸核糖转移酶与如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列相比在选自至少一个下述位点处具有至少一个突变：第180位、第182位、第231位、第298位、第338位以及第377位。
8.根据权利要求7所述的制备烟酰胺单核苷酸的方法，其特征在于所述烟酰胺磷酸核糖转移酶具有至少一个下述突变：F180A、F180W、A182Y、E231A、E231Q、D298A、D298N、D298E、D338N、D338E、D377A、D377N以及D377E。
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