[发明专利]表达埃博拉病毒糖蛋白的基于巨细胞病毒的疫苗

说明书

本发明提供了一种基于疱疹病毒的重组载体，其包含编码异源抗原的核酸序列和用于控制所述抗原表达的启动子，其中所述启动子在选定时间表达以在受试者中提供所需免疫应答。

技术领域

本发明总的来说涉及免疫应答，并且更具体来说，涉及提供差异免疫应答调节的启动子用法。

本文中引用或参考的所有文献和在本文中引用的文献中引用或参考的所有文献，与本文中或通过参考并入本文的任何文献中提到的任何产品的任何制造商的说明书、描述、产品说明书和产品单一起，通过参考并入本文，并且可以使用在本发明的实践中。更具体来说，所有参考文献通过参考并入本文，其程度如同每个单独的文献被具体且单独地指明通过参考并入本文。

背景技术

疱疹病毒科(Herpesviridae)是一大类在动物、包括人类中引起疾病的DNA病毒。这个科的成员也被称为疱疹病毒。

所有疱疹病毒都由包装在被称为衣壳的二十面体蛋白笼内的编码100-200个基因的相对大的双链线性DNA基因组构成，所述衣壳本身被包裹在被称为壳皮的含有病毒蛋白和病毒mRNA两者的蛋白质层和被称为包膜的脂双层膜中。该整个粒子被称为病毒粒子。

基于巨细胞病毒(CMV)的疫苗以及其他基于疱疹病毒的疫苗，作为我们对抗传染病和癌症的武器库的有希望的补充，正初露端倪。这些基于疱疹病毒的载体(vector)是独特的，不仅在于它们针对异源编码的病原体(或癌症)靶抗原诱导高水平的T细胞免疫力，而且在于所述免疫力的耐久性及其“即时效应物”性质。

CMV是疱疹病毒科β亚类的成员。到目前为止，CMV是表征最为充分的基于疱疹病毒的疫苗载体。

最近已显示，针对HIV的猴类版本(猿猴免疫缺陷病毒，SIV)的基于RhCMV的疫苗在恒河猴中诱导针对系统性感染的保护——所述保护的水平以前对任何SIV疫苗接种方案从未观察到。

最近也已显示，基于CMV的疫苗在使用小鼠CMV(MCMV)的小鼠模型系统中，针对这些多样化的病原体和疾病例如埃博拉病毒、破伤风和前列腺癌提供保护。

尽管已显示基于CMV的(和基于其他发育程度较低的疱疹病毒的)疫苗诱导针对编码的异源靶抗原的显著水平的T细胞应答，但尚未通过这些载体实现针对这些靶的显著抗体应答的诱导。这种T细胞偏倚性被视为这些疫苗广泛应用于靶传染病和癌症的限制。大量参考文献(专利和出版物)提供了证据，支持基于疱疹病毒的疫苗一般不能诱导抗体应答。

发明概述

本发明源自于我们在用表达埃博拉病毒靶抗原(埃博拉病毒糖蛋白，GP)的恒河猴CMV疫苗接种的恒河猴中进行的埃博拉病毒激惹研究的出人意料的发现。

疱疹病毒基因的特征在于它们的表达动力学与疱疹病毒复制周期的关系的差异。基于表达的时间，疱疹病毒基因被分类成立即早期(IE)、早期(E)或晚期(L)基因。

在我们的埃博拉研究之前制造的所有基于RhCMV的载体中，异源靶抗原被置于在IE/E时间表达或仍未定性的异源启动子之下(基于其他非人类灵长动物疱疹病毒的载体和MCMV的情况也是如此)。相反，在我们的埃博拉研究中使用的CMV载体被设计成通过用埃博拉病毒GP基因替换非必需的Rh112(人CMV UL83直系同源物)基因，将所述埃博拉病毒GP置于RhCMV内源的pp65b启动子之下。这将GP置于在L时间表达的pp65启动子的控制之下。这种L启动子的使用在灵长动物模型中引起与基于CMV和其他疱疹病毒的载体相关的正常免疫应答的完全逆转。具体来说，它引起由恒河猴CMV疫苗诱导的免疫应答严重偏向GP特异性抗体的诱导，并极少诱导GP特异性T细胞应答。