[发明专利]生产酵母突变体的方法及其用途

权利要求书

1.产生酵母突变体的方法，其中至少一个酵母株在第一诱变步骤中与第一诱变剂接触并且在第二诱变步骤中与第二诱变剂接触，所述方法的特征在于

-所述第一和第二诱变剂互相不同并且选自下组：

核苷酸-烷基化剂、核苷酸-脱氨基剂和UV辐射，并且

-第一选择步骤在所述第一和第二诱变步骤之间进行且第二选择步骤在所述第二诱变步骤之后进行，其中使来自在先诱变步骤的突变体暴露于选自下组的选择因素：

(a)高渗培养基和

(b)醇-脱氢酶抑制剂。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述核苷酸-烷基化剂选自以下：硫酸二甲酯(DMS)，甲磺酸乙酯(EMS)，甲磺酸甲酯(MMS)，1-甲基-3-硝基-1-亚硝基胍(MNNG)，甲基亚硝基氰胺(MNC)，甲基亚硝基脲(MNU)和DNA甲基转移酶。

3.如权利要求1和2中任一项所述的方法，其特征在于，所述核苷酸-脱氨基剂选自以下：无机亚硝酸盐、有机亚硝酸盐和亚硝酸。

4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于，所述第一诱变剂是核苷酸-烷基化剂或核苷酸-脱氨基剂。

5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于，所述第一诱变剂是核苷酸-烷基化剂并且所述第二诱变剂是核苷酸-脱氨基剂或UV辐射。

6.如权利要求1-5中任一项所述的方法，其特征在于，通过加入以下物质之一获得所述高渗培养基：以下的氯化物和硫酸盐：钠，钾，镁，钙，和糖，包括果糖和葡萄糖，以及糖醇，包括山梨糖醇和甘露醇。

7.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其特征在于，所述醇脱氢酶抑制剂选自以下：吡唑、3-甲基吡唑、4-甲基吡唑和乙酰水杨酸。

8.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其特征在于，所述选择因素之一选自组(a)并且所述选择因素之一选自组(b)。

9.如权利要求1-8中任一项所述的方法，其特征在于，在所述第一选择步骤之后进行测试步骤，其中测试在所述第一选择步骤之后获得的中间酵母突变体是否在相同条件下与初始使用的酵母株相比在乙醇发酵过程中产生更多的甘油，由此仅对符合该标准的中间酵母突变体进行所述第二诱变步骤和所述第二选择步骤。

10.通过如权利要求1-9中任一项所述的方法获得并且以保藏号DSM29822保藏在德国微生物菌种保藏中心的酵母突变体。

11.通过如权利要求1-9中任一项所述的方法获得酵母突变体，其特征在于，在90°Oe(21.6％白利度)和NOPA值＝107mg/l的汁以4x10⁶/ml的剂量发酵期间，在15-25℃的发酵温度下35天后，所述突变体产生具有以下比例的乙醇和甘油的葡萄酒：

乙醇 70-150g/l

甘油 10-20g/l。

12.通过如权利要求1-9中任一项所述的方法获得酵母突变体，或如权利要求10所述的酵母突变体，或如权利要求11所述的酵母突变体在生产酒精饮料的方法中的用途。

13.如权利要求12所述的用途，其特征在于，所述酒精饮料由葡萄汁产生。