[发明专利]增强的蛋白质表达

权利要求书

1.一种DNA分子，该DNA分子在5'至3'方向上包含与编码感兴趣的基因(GOI)的核酸序列可操作地连接的5'非翻译区(5'UTR)核酸序列，其中该5'UTR衍生自芽孢杆菌属物种aprE蛋白酶基因并且其中该5'UTR与其中该5'UTR可操作连接的GOI是异源的。

2.如权利要求1所述的DNA分子，其中该5'UTR衍生自来自枯草芽孢杆菌的aprE基因。

3.如权利要求1所述的DNA分子，其中该5'UTR包含与SEQ ID NO:9具有至少90％序列同一性的序列。

4.如权利要求1所述的DNA分子，其中该5'UTR包含与SEQ ID NO:2具有至少90％序列同一性的序列。

5.如权利要求1所述的DNA分子，其中该5'UTR包含与SEQ ID NO:10具有至少90％序列同一性的序列。

6.如权利要求1所述的DNA分子，其中该5'UTR包含与SEQ ID NO:17具有至少90％序列同一性的序列。

7.一种表达盒，包含如权利要求1所述的DNA分子。

8.一种宿主细胞，包含如权利要求7所述的表达盒。

9.一种载体，包含如权利要求1所述的DNA分子。

10.一种宿主细胞，包含如权利要求9所述的载体。

11.一种宿主细胞，包含如权利要求1所述的DNA分子。

12.根据权利要求8、10或11中任一项所述的宿主细胞，其中该宿主细胞属于芽孢杆菌属物种。

13.如权利要求12所述的宿主细胞，其中该芽孢杆菌属物种选自下组，该组由以下各项组成：地衣芽孢杆菌、迟缓芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、嗜碱芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、短小芽胞杆菌、灿烂芽胞杆菌、克劳氏芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌。

14.如权利要求13所述的宿主细胞，其中该芽孢杆菌属物种是地衣芽孢杆菌。

15.如权利要求1所述的DNA分子，其中该感兴趣的基因编码酶。

16.如权利要求15所述的DNA分子，其中该感兴趣的基因编码野生型芽孢杆菌属物种的酶或变体芽孢杆菌属物种的酶。

17.如权利要求15所述的DNA分子，其中该酶选自下组，该组由以下各项组成：酰基转移酶、α-淀粉酶、β-淀粉酶、α-半乳糖苷酶、阿拉伯糖苷酶、芳基酯酶、β-半乳糖苷酶、角叉菜胶酶、过氧化氢酶、纤维二糖水解酶、纤维素酶、软骨素酶、角质酶、内切-β-1,4-葡聚糖酶、内切-β-甘露聚糖酶、酯酶、外切-甘露聚糖酶、半乳聚糖酶、葡糖淀粉酶、半纤维素酶、透明质酸酶、角蛋白酶、漆酶、乳糖酶、木质素酶、脂肪酶、脂肪氧合酶、甘露聚糖酶、氧化酶、果胶酸裂解酶、果胶乙酰酯酶、果胶酶、戊聚糖酶、过氧化物酶、酚氧化酶、磷酸酶、磷脂酶、植酸酶、多半乳糖醛酸酶、蛋白酶、支链淀粉酶、还原酶、鼠李糖半乳糖醛酸酶、β-葡聚糖酶、鞣酸酶、转谷氨酰胺酶、木聚糖乙酰酯酶、木聚糖酶、木葡聚糖酶和木糖苷酶。

18.如权利要求15所述的DNA分子，其中该酶是淀粉酶或支链淀粉酶。

19.一种DNA分子，该DNA分子包含与选自下组的序列具有90％序列同一性的序列，该组由以下各项组成：SEQ ID NO:3和11-16。

20.一种DNA分子，该DNA分子包含选自下组的序列，该组由以下各项组成：SEQ ID NO:3和11-16。

21.一种用于增加感兴趣的蛋白质在芽孢杆菌属宿主细胞中的表达的方法，该方法包括：使修饰的芽孢杆菌属宿主细胞在合适的培养基中生长以表达该感兴趣的蛋白质；其中将该修饰的芽孢杆菌属宿主细胞用包含表达盒的载体进行转化，该表达盒在5’至3’方向上至少包含(i)衍生自芽孢杆菌属物种的aprE-5’UTR和(ii)编码感兴趣的蛋白质的核酸序列；其中与从亲本芽孢杆菌属宿主细胞中表达的感兴趣的蛋白质的表达相比，该相同的感兴趣的蛋白质的表达增加了至少5％，该亲本芽孢杆菌属宿主细胞不包含可操作地连接到编码该感兴趣的蛋白质的核酸序列上的aprE-5’UTR。