[发明专利]增强的蛋白质表达

说明书

相关申请的交叉引用

本申请要求于2015年2月19日提交、目前未决的美国临时专利申请序列号62/118,382的优先权。

序列表的引用

命名为“NB40178WOPCT-Sequence-Listing.txt”的文本文件序列表的电子提交的内容创建于2015年2月17日，并且大小为27KB，将其以全文通过引用特此结合。

发明领域

本发明总体上涉及具有遗传改变的细菌细胞，以及制造和使用此类细胞的方法，该遗传改变导致感兴趣的蛋白质的增加的表达。本发明的方面包括革兰氏阳性微生物(例如芽孢杆菌属物种)，这些微生物具有导致感兴趣的蛋白质表达增强的遗传改变。

背景技术

遗传工程已经允许改进在食品发酵中用作工业生物反应器和细胞工厂的微生物。包括多个芽孢杆菌属物种的革兰氏阳性生物体被用于产生大量有用的蛋白质和代谢产物(参见，例如，Zukowski，“Production of commercially valuable products[有商业价值的产品的生产]”，在Doi和McGlouglin主编的Biology of Bacilli: Applications to Industry [杆菌生物学：工业应用]中，巴特沃思-海涅曼出版公司(Butterworth-Heinemann)，斯通哈姆，马萨诸塞州，第311-337页，[1992])。工业中使用的常见芽孢杆菌属物种包括但不限于地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌。除了在一般工业环境(例如，除了其他用途之外，用于洗涤剂、生物质燃料生产的酶)中使用这些微生物，由于这些微生物的GRAS(通常被认为是安全的)状态，这些芽孢杆菌属物种的菌株是用于生产用于食品和制药工业的蛋白质的天然候选物。在革兰氏阳性生物体中产生的蛋白质的实例包括但不限于酶，例如淀粉酶、中性蛋白酶、碱性(或丝氨酸)蛋白酶和支链淀粉酶。

尽管对细菌宿主细胞中蛋白质的生产的理解有所进展，但是仍然需要开发新的表达增加水平的感兴趣的蛋白质的重组菌株。

发明简述

在某些实施例中，本发明涉及重组(即，遗传修饰的)细菌(宿主)细胞，以及其用于增加编码感兴趣的蛋白质的感兴趣的基因表达的方法。在一些其他实施例中，本发明涉及在本披露的重组(修饰的)细菌宿主细胞中一种或多种感兴趣的蛋白质的增加的生产。在仍然其他实施例中，本发明涉及修饰用于表达和/或产生一种或多种感兴趣的蛋白质的细菌宿主细胞的方法。在某些其他实施例中，本发明涉及本文所阐述的令人惊奇且意想不到的结果，其表明使用与感兴趣的基因可操作地组合的某些强5’UTR会导致感兴趣的蛋白质的更高表达。

因此，在某些实施例中，本发明涉及DNA分子，这些DNA分子在5'至3'方向上包含5'非翻译区(5'UTR)和感兴趣的异源基因的编码区。在其他实施例中，本发明涉及一种DNA分子，该DNA分子在5'至3'方向上包含5'非翻译区(5'UTR)和感兴趣的异源基因的编码区，其中该5’UTR衍生自来自芽孢杆菌属物种的aprE蛋白酶基因。在其他实施例中，该5’UTR衍生自来自枯草芽孢杆菌的aprE基因。

因此，在某些实施例中，用于在表达感兴趣的基因中使用的本披露的5’UTR衍生自枯草芽孢杆菌aprE-5’UTR。在某些其他实施例中，用于在表达感兴趣的基因中使用的本披露的5'UTR衍生自枯草芽孢杆菌aprE-5'UTR，其包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:17所示的核苷酸序列。在某些其他实施例中，本披露的5'UTR包含与SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:17所示的核酸序列具有至少90％序列同一性的核苷酸序列。

在另一个实施例中，本发明涉及包含任何上述DNA序列的载体。