[发明专利]在色谱过程中利用碱洗涤去除杂质

权利要求书

1.一种从包含感兴趣的蛋白质和一种或多种污染物的混合物中纯化感兴趣的蛋白质的方法，其中所述混合物是哺乳动物细胞培养物，所述方法包括：

a)将所述混合物暴露于第一色谱基质，其中所述感兴趣的蛋白质与第一色谱基质结合，且其中所述第一色谱是亲和色谱；

b)使第一色谱基质与pH为9.6-10.4、并且不包含精氨酸或精氨酸衍生物的第一洗涤溶液接触；

c)在所述第一洗涤溶液之后，使所述第一色谱基质与pH为至少9.0、并且不包含精氨酸或精氨酸衍生物的第二洗涤溶液接触；和

d)将感兴趣的蛋白质从第一色谱基质洗脱到洗脱溶液中，

其中所述亲和色谱是蛋白A亲和色谱。

2.权利要求1的方法，其中所述污染物选自宿主细胞蛋白、宿主细胞代谢物、宿主细胞组成型蛋白、核酸、内毒素、病毒、产品相关污染物、脂质、培养基添加剂和培养基衍生物。

3.权利要求1的方法，其中所述感兴趣的蛋白质选自抗体、抗体片段和Fc融合蛋白。

4.权利要求3的方法，其中所述抗体是单克隆抗体。

5.权利要求4的方法，其中所述单克隆抗体选自人抗体、人源化抗体、和嵌合抗体。

6.权利要求1所述的方法，其中所述第一洗涤溶液的pH为9.6。

7.权利要求1的方法，其中所述第一洗涤溶液的pH为10.4。

8.权利要求1的方法，还包括在所述第二洗涤溶液之后，使所述第一色谱基质与pH为6至7之间、并且不包含精氨酸或精氨酸衍生物的第三洗涤溶液接触。

9.权利要求1的方法，其中所述第一洗涤溶液包含浓度在0.01-1.0M范围内的碳酸钠和浓度在0.5-2M范围内的氯化钠。

10.权利要求1的方法，其中所述第二洗涤溶液包含浓度在0.01-1.0M范围内的碳酸钠。

11.权利要求1的方法，其中所述混合物被暴露于一种或多种另外的色谱基质。

12.权利要求11的方法，其中所述一种或多种另外的色谱基质选自离子交换色谱、疏水相互作用色谱和混合模式色谱。

13.权利要求11的方法，其中所述一种或多种另外的色谱基质为阴离子交换色谱或阳离子交换色谱。

14.权利要求1的方法，其中所述混合物选自收获的细胞培养液、细胞培养上清液、和条件化的细胞培养物上清液、细胞裂解物、和经澄清化的粗料。

15.权利要求1的方法，其中所述哺乳动物细胞培养物是中华仓鼠卵巢(CHO)细胞培养物。