[发明专利]在色谱过程中利用碱洗涤去除杂质

说明书

在特定的实施方案中，本发明提供从包含感兴趣的蛋白质及一种或多种污染物的混合物纯化感兴趣的蛋白质的方法，所述方法包括：a)将所述混合物暴露于第一色谱基质，其中所述感兴趣的蛋白质与第一色谱基质结合；b)使第一色谱基质与pH为至少9.0，并且不包含精氨酸或精氨酸衍生物的第一洗涤溶液接触；和c)将感兴趣的蛋白质从第一色谱基质洗脱到洗脱溶液中。

对相关申请的交叉引用

本申请要求2015年3月13日递交的美国临时申请序列号62/132,974的优先权，该申请的全部内容通过提述并入本文。

发明背景

蛋白质的大规模经济纯化越来越成为生物医药产业的重要课题。治疗用蛋白质通常是利用工程化原核或真核细胞系表达的，它们经过工程化从而自含有编码感兴趣的蛋白质的基因的重组质粒表达感兴趣的蛋白质。对于生物制品制造者而言，从投放给细胞的组分与细胞副产品的混合物中纯化期望的蛋白质至足够纯度，例如足以用作人用治疗剂的纯度，是一项严峻的挑战。

因此，本领域对这样的替代的蛋白质纯化方法存在需求：其能够用于加快基于蛋白质的治疗剂，例如来自细胞培养物的抗体的大规模加工。

发明概述

在特定实施方案中，本发明提供一种从包含感兴趣的蛋白质和一种或多种污染物的混合物中纯化感兴趣的蛋白质的方法，包括a)使所述混合物暴露于第一色谱基质，其中感兴趣的蛋白质结合至该第一色谱基质；b)使所述第一色谱基质与具有至少9.0的pH、且不包含精氨酸或精氨酸衍生物的第一洗涤溶液接触，和c)将感兴趣的蛋白质从第一色谱基质洗脱到洗脱溶液中。示例而言，污染物选自宿主细胞蛋白质、宿主细胞代谢物、宿主细胞组成型蛋白质、核酸、内毒素、病毒、产品相关的污染物、脂质、培养基添加剂和培养基衍生物。任选地，第一色谱是亲和色谱(例如蛋白A亲和色谱或蛋白G亲和色谱)。优选地，所述亲和色谱是蛋白A色谱。示例而言，感兴趣的蛋白质选自抗体、抗体片段和Fc融合蛋白。一种示例的感兴趣的蛋白质是抗体，如单克隆抗体(包括但不限于人抗体、人源化抗体和嵌合抗体)。

在特定的具体实施方案中，第一洗涤溶液的pH为约9到约11之间。任选地，第一洗涤溶液的pH为约9.5到约10.5之间(例如9.5，9.6，9.7，9.8，9.9，10.0，10.1，10.2，10.3，10.4或10.5)。第一洗涤溶液的一个示例性pH是约9.6。第一洗涤溶液的另一个示例性pH是约10.4。

在特定的具体实施方案中，所述方法进一步包括，在所述第一洗涤溶液之后，使第一色谱基质与具有至少9.0的pH、且不包含精氨酸或精氨酸衍生物的第二洗涤溶液接触。例如，所述第一洗涤溶液包含浓度在约0.01-1.0M范围的碳酸钠，和浓度在约0.5-2M范围的氯化钠。例如，所述第二洗涤溶液包含浓度在约0.01-1.0M范围的碳酸钠。

在特定的具体实施方案中，混合物被暴露于一种或多种其他色谱基质。示例而言，第一色谱是亲和色谱，而一种或多种其他色谱基质选自离子交换色谱(例如阴离子交换色谱或阳离子交换色谱)、疏水相互作用色谱、以及混合模式色谱。任选地，所述混合物选自：收获的细胞培养物流体、细胞培养物上清、和条件化的细胞培养物上清、细胞裂解物、和经澄清化的粗料(clarified bulk)。例如，细胞培养物是哺乳动物细胞培养物，如中华仓鼠卵巢(CHO)细胞培养物。

附图简要说明

图1显示标准纯化过程和新过程的概览。

图2显示各种pH洗涤对CHO-HCP减少的影响。

图3显示高pH洗涤对CHO-HCP减少的影响。

图4显示高pH洗涤对CHO-DNA水平的清除的影响。

图5显示高pH洗涤对残余蛋白A水平的清除的影响。

图6显示各种备选过程降低CHO-HCP水平的效率的比较。