[发明专利]肉毒神经毒素特异性捕获剂、组合物、使用方法和制造方法

说明书

本申请提供了稳定的基于肽的肉毒神经毒素(BoNT)A型捕获剂、以及作为检测试剂和诊断试剂使用以及在治疗疾病和病症中使用的方法。该申请还提供了使用迭代珠粒原位点击化学制备BoNT A型捕获剂的方法。

相关申请的交叉引用

本申请要求于2015年3月16日提交的美国临时专利申请第62/133,891号的优先权，通过引用将其全部内容并入本文。

背景技术

肉毒神经毒素(BoNT)A型是已知的最致命的毒素。BoNT是由细菌属(梭菌属)的一些菌种产生，并且是一种化学去神经锌依赖性蛋白酶，其通过切割突触小泡形成和释放所需的三种SNARE蛋白之一来阻止神经肌肉接点中的Ca²⁺诱发的乙酰胆碱释放。BoNT/A中毒是通过以下进行的：选择性结合神经元受体，通过受体介导的内吞作用进入细胞，通过pH诱导的易位逃离胞内体，最后在细胞质切割其SNAP-25底物。BoNT/A由结合受体的重链和二硫键连接的催化性轻链(LC)组成。这种二硫键需要是完整的而对神经元产生毒害，但是对于LC在细胞质中起催化作用而需将其破坏。亚域(“带”)在结构上地封闭了完整全毒素活性位点，使得药物诱导的抑制仅仅在带释放后才发生，而这通过细胞质环境的二硫键的还原得以促进。BoNT毒素快速地螯合至运动神经元中，限制了目前基于抗体的疗法，然而分子抑制剂不能进入循环BoNT的封闭活性位点。BoNT是潜在致命性生物武器，又是治疗剂和美容剂，同时伴随着意外的过量给药的风险。仍需要强有力和有效的抑制剂。

发明内容

本公开涉及设计成与肉毒神经毒素(BoNT)A型结合的化学合成的捕获剂(称为蛋白质催化的捕获剂或PCC试剂)、制备所述捕获剂的方法、使用所述捕获剂的方法，以抑制BoNT A型以及治疗或预防肉毒中毒或肉毒毒素中毒。

在一个方面，本文提供了特异性结合BoNT A型的稳定的合成捕获剂，其中肉毒神经毒素A型蛋白包含重链和轻链，其中轻链包含酶活性位点，其中捕获剂包含锚定配体和第二配体，其中锚定配体和第二配体选择性结合BoNT A型。

在另一方面，本文提供了包含一种以上的本发明的特异性结合BoNT A型的合成捕获剂的组合物。

在另一方面，本文提供了用于检测生物样品中BoNT A型的方法，包括使用一种以上的本发明捕获剂处理生物样品的步骤。

在另一方面，本文提供了抑制在有需要的受试者的一个以上的神经元中由肉毒神经毒素A型蛋白介导的SNAP-25切割的方法，所述方法包括向神经元给予有效量的一种以上的本发明的捕获剂。

在另一方面，本文提供了治疗有需要的受试者肉毒中毒的方法，所述方法包括给予治疗有效量的一种以上的本发明的捕获剂。

锚定配体

在捕获剂的一个实施方式中，锚定配体特异性地结合BoNT A型的酶活性位点。在另一个实施方式中，锚定配体包含式Dab(DNP)-R-Lys(N3)-T-Dab-Pra-L-NH-(SEQ ID NO:2)的环肽，其中N3部分和Pra部分一起表示Tz4键或Tz5键。在另一个实施方式中，锚定配体包含式Inh-1的分子

其中R¹不存在或者是连接至第二配体的接头。

第二配体