[发明专利]从初始T细胞群体生成病毒或其他抗原‑特异性T细胞

权利要求书

1.用于产生病毒-或其他抗原-特异性T细胞的方法，包括：

(a)将来自脐带血样品或含有初始免疫细胞的其他样品的单核细胞分成两部分；

(b)使所述样品的第一部分与PHA或另一种促分裂原以及任选地与IL-2接触，以产生ATC(“活化的T细胞”)，并用辐射或其他试剂处理ATC以抑制其向外生长；

(c)从树突状细胞和树突状前体细胞(例如非贴壁细胞，CD11C⁺或CD14⁺细胞)中分离T细胞和T细胞前体细胞(例如非贴壁细胞，CD3⁺细胞)；

(d)冷冻保存或以其他方式保存非贴壁细胞；

(e)将第二部分中的贴壁细胞与产生和成熟树突状细胞的IL-4和GM-CSF或其他细胞因子或其他试剂并与至少一种CMV肽抗原或其他肽抗原接触以产生呈递至少一种肽抗原的抗原呈递树突状细胞，并用辐射或其他足以抑制其向外生长的试剂处理所述抗原呈递树突状细胞；

(f)在IL-7和IL-15存在下，将来自(d)的冷冻保存或以其他方式保存的非贴壁细胞与(e)中产生的树突状抗原呈递细胞接触，以产生识别至少一种肽抗原的病毒-或其他抗原-特异性T细胞；

(g)在至少一种肽抗原存在下，在K562细胞或其他辅助细胞存在下，并且在IL-15的存在下，将由(f)产生的病毒或其他抗原-特异性T细胞与(b)的ATC接触；任选地，重复(g)一次或多次；

(h)回收识别所述至少一种病毒-或其他类型肽抗原的病毒-或其他抗原-特异性T细胞；和

(i)任选地，将所述抗原特异性T细胞施用于有需要的受试者或对所述抗原特异性T细胞建库或储存。

2.权利要求1的方法，其进一步包括在(a)之前从脐带血或另一种含有初始T细胞的样品中分离单核细胞。

3.权利要求1的方法，其中所述单核细胞获自脐带血。

4.权利要求1的方法，其中所述单核细胞获自对于所述至少一种病毒或其他肽抗原是初始的干细胞。

5.权利要求1的方法，其中所述单核细胞获自含有干细胞、前体T细胞或T细胞的样品，所述样品来自其免疫系统对于所述至少一种病毒或其他肽抗原是初始的受试者。

6.权利要求1的方法，其中(b)包括将所述样品的第一部分与PHA和与IL-2接触以产生ATC(“活化的T细胞”)。

7.权利要求1的方法，其包括在(b)中，将约1至2000万，优选地500-1500万，最优选地约800-1200万的单核脐带血细胞与PHA和IL-2接触。

8.权利要求1的方法，其中(b)包括产生T-母细胞、B-母细胞、淋巴母细胞样细胞或CD3-CD28母细胞。

9.权利要求1的方法，其中通过在足以使第二部分中细胞贴壁至固体培养基的条件下，使所述第二部分与固体培养基接触一段时间，将T细胞和T细胞前体细胞从树突状细胞和树突状细胞前体细胞中分离，然后从固体培养基中移除T细胞和T细胞前体细胞，并回收贴壁至固体培养基的树突状细胞和树突状前体细胞。

10.权利要求1的方法，其中在(e)中，将所述树突状细胞和树突状前体细胞与选自IL-4和GM-CSF的至少一种树突状细胞生成细胞因子接触。

11.权利要求7的方法，其中在(e)中，将所述树突状细胞和树突状前体细胞与选自LPS、TNF-α、IL-1β、IL-6、PGE-1和PGE-2的树突状细胞成熟细胞因子或试剂；以及IL-4和GM-CSF接触。

12.权利要求1的方法，其中在(f)中或(f)之前，处理树突状细胞和树突状前体细胞以扩增CD45RA阳性细胞。

13.权利要求1的方法，其中在(f)中或(f)之前，处理树突状细胞和树突状前体细胞以耗尽CD45RO阳性细胞。

14.权利要求1的方法，其中所述至少一种病毒或其他肽抗原包含一系列的重叠肽。

15.权利要求1的方法，其中所述至少一种病毒或其他肽抗原包含肿瘤相关或肿瘤特异性抗原。