[发明专利]鉴定并验证亲和试剂的方法

权利要求书

1.一种鉴定并验证结合部分能够结合靶多肽的方法，所述方法包括：

(a)提供多种病毒，每种病毒包括：

编码结合部分的核酸，其中所述结合部分展示在所述病毒表面；

(b)与所述靶多肽或其肽片段一起温育所述多种所述病毒；

(c)检查所述病毒展示的所述结合部分是否结合所述靶多肽或其所述肽片段；

(d)对于每个鉴定为能够结合所述靶多肽的所述结合部分，在细胞中表达：

（i）第一融合蛋白，其包括鉴定为能够结合所述靶多肽的特定结合部分和第一报告部分，以及

（ii）第二融合蛋白，其包括所述靶多肽或其肽片段，以及第二报告部分，

其中所述特定结合部分与所述靶多肽或其所述肽片段的结合导致所述细胞中可检测基因的表达，其中所述可检测基因的表达处于所述第一报告部分和所述第二报告部分的控制之下；并且

（e）测定是否每个所述细胞表达所述可检测基因，从而验证鉴定为能够结合所述靶多肽的所述结合部分能够与所述靶多肽结合。

2.根据权利要求1所述的方法，其中在所述检查步骤和所述测序步骤中将多个结合部分鉴定为能够结合所述靶多肽，所述方法还包括根据步骤（d）在不同细胞中表达每个所述鉴定的结合部分，以及根据步骤（e）测定是否每个所述不同细胞表达所述可检测基因。

3.根据权利要求1或2所述的方法，还包括产生至少一个所述验证过的结合部分的多个变体，并且使用所述多个变体作为步骤（a）的所述结合部分重复步骤（a）-（e）。

4.一种验证在结合部分和靶多肽之间的结合相互作用的方法，所述方法包括：

在细胞中表达：

(a)第一融合蛋白，其包括结合部分和第一报告部分，以及

(b)第二融合蛋白，其包括靶多肽或其肽片段，以及第二报告部分；

通过以下步骤已经将所述结合部分鉴定为能够结合所述靶多肽：

（i）在病毒上表达编码所述结合部分的核酸，其中所述结合部分展示在所述病毒表面，

（ii）与所述靶多肽或其所述肽片段一起温育所述病毒，并且

（iii）检查所述病毒展示的所述结合部分是否结合所述靶多肽或其所述肽片段；

其中所述细胞中所述结合部分与所述靶多肽或其所述肽片段的结合导致所述细胞表达可检测基因，其中所述可检测基因的表达处于所述第一报告部分和所述第二报告部分的控制之下；并且

测定是否所述细胞表达所述可检测基因，从而验证所述结合部分能够结合所述靶多肽。

5.根据权利要求4所述的方法，还包括用一个或多个另外的结合部分重复所述表达步骤和所述测定步骤，已经根据步骤（i）-（iii）将所述一个或多个另外的结合部分鉴定为能够结合所述靶多肽。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述结合部分是抗体或抗体片段。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述结合部分是单链可变片段（scFv）。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述scFv包括抗体框架，其包括与SEQ ID NO:1具有至少90% 的序列同一性的氨基酸序列。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述温育步骤包括与所述靶多肽的肽片段一起温育所述病毒。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述靶多肽的所述肽片段的长度少于约40个氨基酸。

11.根据权利要求9所述的方法，其中所述靶多肽的所述肽片段的长度多于约40个氨基酸。

12.根据权利要求9所述的方法，其中所述靶多肽的所述肽片段的长度为约30-100个氨基酸。

13.根据权利要求9-12中任一项所述的方法，其中所述肽片段是合成的。

14.根据权利要求1-13中任一项所述的方法，其中所述第二融合蛋白包括所述靶多肽的全长氨基酸序列。

15.根据权利要求1-14中任一项所述的方法，其中所述靶多肽经翻译后修饰。

16.根据权利要求15所述的方法，其中所述靶多肽是磷酸化的。

17.根据权利要求1-16中任一项所述的方法，其中所述靶多肽是可溶性蛋白。