[发明专利]用于得到体内存留性和治疗活性的NKT细胞亚群以及其繁殖

权利要求书

1.一种制备用于免疫疗法中的人类I型自然杀手T细胞的方法，所述方法包含以下步骤：

a) 从未培养的人类外周血单核细胞中分离人类I型自然杀手T细胞；和

b) 通过在白介素-21，选自白介素-2、白介素-7、白介素-15、白介素-12、肿瘤坏死因子α以及其组合的一种或多种细胞因子，和一种或多种共刺激剂的存在下进行培养使所述分离的人类I型自然杀手T细胞中的CD62L阳性人类I型自然杀手T细胞富集，以富集所述分离的I型自然杀手T细胞中的CD62L阳性人类I型自然杀手T细胞，

其中在所述培养之后，大多数所述分离的人类I型自然杀手T细胞是CD62L阳性人类I型自然杀手T细胞。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述一种或多种共刺激剂包括： a）包含用于T细胞受体的促效性抗体或配位体和一种或多种靶向共刺激性受体的促效性抗体的衬底；或b）表达CD1d和一种或多种共刺激性受体的一种或多种配位体的抗原呈递细胞。

3.根据权利要求1或2所述的方法，进一步包括修饰所述CD62L阳性人类I型自然杀手T细胞以表达一种或多种嵌合抗原受体、T细胞受体、一种或多种细胞因子、一种或多种细胞因子受体、一种或多种嵌合细胞因子受体或其组合的步骤。

4. CD62L阳性人类I型自然杀手T细胞群体在制备用于免疫疗法的药物中的应用，其中所述人类I型自然杀手T细胞群体包括大多数的所述CD62L阳性人类I型自然杀手T细胞。

5.经过共刺激的CD62L阳性人类I型自然杀手T细胞群体在制备用于免疫疗法的药物中的应用，其中通过使包括CD62L阳性人类I型自然杀手T细胞和CD62L阴性人类I型自然杀手T细胞的分离的人类I型自然杀手T细胞的群体混合物在白介素-21存在下暴露于选自白介素-2、白介素-7、白介素-15、白介素-12、肿瘤坏死因子α以及其组合的一种或多种细胞因子和一种或多种共刺激剂中来使所述CD62L阳性人类I型自然杀手T细胞从所述群体混合物中扩增以制造经过共刺激的CD62L阳性人类I型自然杀手T细胞。

6.根据权利要求5所述的应用，其中所述共刺激剂包含：

a）包含用于T细胞受体的促效性抗体或配位体和一种或多种靶向共刺激性受体的促效性抗体的衬底；

b）包含CD1d和一种或多种共刺激性受体中一种或多种配位体的表达的抗原呈递细胞；或

c）其组合。

7.根据权利要求6所述的应用，其中在所述抗原呈递细胞中表达的所述CD1d与促效性糖脂结合。

8.根据权利要求7所述的应用，其中所述促效性糖脂是α-半乳糖基神经酰胺。

9.根据权利要求6所述的应用，其中所述一种或多种细胞因子选自由以下组成的群组：白介素-2、白介素-7、白介素-15、以及其组合。

10.根据权利要求6到9中任一项所述的应用，其中所述衬底是珠粒、板或凝胶。

11.根据权利要求6到9中任一项所述的应用，其中用一种或多种多核苷酸对所述抗原呈递细胞进行转导以导致所述一种或多种共刺激性受体的一种或多种所述配位体的表达。

12.根据权利要求6到9中任一项所述的应用，其中所述一种或多种共刺激性受体是CD28、OX40、4-1BB、ICOS、CD40、CD30、CD27或其组合。

13.根据权利要求6到9中任一项所述的应用，其中所述一种或多种共刺激性受体的所述一种或多种配位体是CD80、CD86、OX40L、4-1BB配位体、ICOS配位体、CD154、CD30配位体或其组合。