[发明专利]基于PIV5的扩增病毒样颗粒

说明书

本发明提供了基于PIV5的扩增VLP(AVLP)的组合物、使用方法和制备方法，该基于PIV5的扩增VLP(AVLP)可以在靶细胞中递送可表达的异源核苷酸序列而不产生后代，并且其在多种动物和人类健康应用，如疫苗接种、基因治疗和癌症治疗中表现出有用的安全性和治疗功效。

相关申请的交叉引用

本申请要求于2015年4月28日提交的美国临时专利申请第62/153,598号的优先权和权益，其全部内容通过引用并入本文。

背景技术

在实验室中已经修改了几种类型的病毒，包括逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒(AAV)和单纯疱疹病毒，用于治疗应用。然而，每个最适合的应用都具有应用上的有限。例如，逆转录病毒载体永久整合到感染细胞的基因组中导致安全问题，且在用于转导时需要有丝细胞分裂。腺病毒载体可以将基因递送到各种分裂和非分裂细胞类型，但感染细胞的免疫消除通常限制体内的基因表达。单纯疱疹病毒可以递送大量的外源DNA；然而，细胞毒性和转基因表达维持仍然是一个障碍。AAV感染许多非分裂和分裂的细胞类型，但是具有有限的DNA能力。显然需要一种更灵活和通用的方法。

发明内容

本公开内容涉及安全且有效地将感兴趣的可表达异源核苷酸递送至靶细胞而不产生病毒后代的副流感5(PIV5)病毒样颗粒(VLP)(本文中简称“扩增病毒样颗粒”或“AVLP”)的组合物、使用方法和制备方法。

在一个实施方式中，本公开包括分离的多核苷酸，其包含(i)PIV5NP、V/P和L基因中每一种的至少一部分，以及(ii)异源非PIV5核苷酸序列，其中所述多核苷酸缺少一种或多种选自由M、F、SH和HN的所组成的组PIV5基因，或不能表达选自由M、F、SH和HN所组成的组的一种或多种PIV5蛋白。

在该实施方式的一个方面，分离的多核苷酸可以包含PIV5NP、V/P和L基因。

在该实施方式的另一方面，分离的多核苷酸可以缺少PIV5M基因或不能表达PIV5M蛋白。

在该实施方式的另一方面，所述异源非PIV5核苷酸序列可以插入在V/P和L基因之间。

在该实施方式的另一方面，M、F、SH和HNPIV5基因中的一个或全部被异源核苷酸序列替代。

在任何上述实施方式的另一方面，所述异源核苷酸序列包含选择标记。在一些实施方式中，所述选择标记可以是Hyg或Hyg-TK。

在任何上述实施方式的另一方面，所述异源核苷酸序列编码选自由RNAi、shRNA、siRNA、反义寡核苷酸和核酶的分子所组成的组。

在任何上述实施方式的另一方面，所述异源核苷酸序列源自除PIV5之外的病毒。在一些实施方式中，所述异源核苷酸序列源自选自由流感病毒、RSV和HIV所组成的组的病毒。在一个实施方式中，所述异源核苷酸序列编码流感病毒HA。在另一个实施方式中，所述异源核苷酸序列编码RSV F。在另一个实施方式中，所述异源核苷酸序列编码HIV Gag、Env或两者。

在任何上述实施方式的另一方面，所述异源核苷酸序列是哺乳动物序列。在一个实施方式中，所述异源核苷酸序列是人序列。

在任何上述实施方式的另一方面，所述异源核苷酸序列编码CFTR或NeuroD1或BMP-2蛋白。

在任何上述实施方式的另一方面，所述异源核苷酸序列编码Cas9和引导RNA。

在任何上述实施方式的另一方面，所述异源核苷酸序列编码分泌蛋白。

在任何上述实施方式的另一方面，所述异源多核苷酸还包含报道基因。在一些实施方式中，所述报道基因编码荧光素酶或绿色荧光蛋白。

在本公开的另一个实施方式中，本公开提供了包含上述实施方式中任一项所述的多核苷酸的载体。