[发明专利]核酸分子的检测有效
| 申请号： | 201680024364.0 | 申请日： | 2016-04-29 |
| 公开（公告）号： | CN107873058B | 公开（公告）日： | 2022-08-02 |
| 发明（设计）人： | 迈克·施皮克曼;尼纳·温特;因加·弗洛尔;加赞费尔·贝尔格 | 申请（专利权）人： | 米尔德泰克特有限责任公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6851 | 分类号： | C12Q1/6851;C12Q1/6886 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人： | 郑斌;尹玉峰 |
| 地址： | 德国*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 核酸 分子 检测 | ||
1.确定生物样品中靶核酸分子的水平的方法，所述方法包括以下步骤：
(i)提供包含从所述生物样品分离/获得的靶核酸的批次A；
(ii)提供步骤(i)中提供的批次A的三个或更多个等分试样，并用所述三个或更多个等分试样中的每一个进行独立的聚合酶链式反应以扩增所述靶核酸分子，从而提供包含经扩增的靶核酸分子的三个或更多个批次B；以及
(iii)将等量的所述三个或更多个批次B混合，从而提供批次C，并通过基于PCR的方法确定批次C中所述靶核酸分子的水平，
其中在步骤(iii)中确定的水平对应于所述生物样品中所述靶核酸分子的水平。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述生物样品中所述靶核酸分子的浓度为1×10-11M至1×10-17M。
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述生物样品中所述靶核酸分子的浓度为1×10-12M至1×10-17M。
4.根据权利要求2所述的方法，其中所述生物样品中所述靶核酸分子的浓度为1×10-13M至1×10-17M。
5.根据权利要求2所述的方法，其中所述生物样品中所述靶核酸分子的浓度为1×10-14M至1×10-17M。
6.根据权利要求2所述的方法，其中所述生物样品中所述靶核酸分子的浓度为1×10-15M至1×10-17M。
7.根据权利要求2所述的方法，其中所述生物样品中所述靶核酸分子的浓度为1×10-16M至1×10-17M。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述靶核酸分子选自靶miRNA、靶无细胞循环DNA、靶mRNA、靶siRNA和靶snRNA。
9.根据权利要求8所述的方法，其中所述靶无细胞循环DNA是靶无细胞循环肿瘤DNA。
10.根据权利要求8所述的方法，其中所述靶核酸分子是靶miRNA。
11.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述生物样品选自体液、组织、细胞、细胞裂解物和细胞培养物上清液。
12.根据权利要求11所述的方法，其中所述体液选自血清、血浆、精浆、水囊肿液、精囊肿液、全血、尿、羊水、渗出液、痰、唾液和脑脊液。
13.根据权利要求11所述的方法，其中所述组织选自天然组织、速冻组织以及福尔马林固定和石蜡包埋的组织。
14.根据权利要求11所述的方法，其中所述组织是肿瘤组织。
15.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中批次A包含从所述生物样品分离/获得的cDNA。
16.根据权利要求15所述的方法，其中步骤(i)包括以下步骤：
(ia)从所述生物样品分离RNA；以及
(ib)将步骤(ia)中分离的所述RNA转化成cDNA，从而提供包含所述cDNA的批次A。
17.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中在步骤(ii)中提供批次A的三个等分试样。
18.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述基于PCR的方法是定量实时PCR或数字PCR。
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