[发明专利]使用力诱导的链侵入原位形成发夹

权利要求书

1.一种制备包含感兴趣的序列的发夹的方法，所述方法包含以下步骤：

a)提供核酸HP1，所述核酸包含：

·与第一表面结合的第一末端；

·连接至所述第一末端的序列A的单链区域，

·与所述单链区域A杂交的序列A'的单链区域，其中所述单链区域A和所述单链区域A'不共价连接；

·与所述序列A'的单链区域连接的至少一个序列C的单链区域；

·与所述序列C的单链区域连接的第二末端，其中所述第二末端结合到第二表面；

·其中第一表面和第二表面之一是可移动的表面，

b)提供至少一种核酸HP2，所述核酸包含：

·包含感兴趣的序列的双链区域，

·与所述双链区域的第一末端连接的环，

·具有序列A的单链区域，其连接至所述双链区域的第二末端的第一链，所述序列A的区域连接至序列C'的单链区域，C'与C互补；

·具有序列A'的单链多核苷酸，其连接至所述双链多核苷酸分子的第二末端的第二链，其中序列A和序列A'的单链多核苷酸杂交；

c)在步骤b)的所述核酸HP2存在时，通过施加至少3pN的拉力移开表面，使步骤a)的所述核酸HP1变性；和

d)获得发夹。

2.根据权利要求1所述的方法，其中：

·所述核酸HP1的所述序列A的单链区域连接至序列D的单链区域，所述序列D的单链区域与所述第一表面结合；和

·核酸HP2的所述序列A'的单链区域连接至具有序列D'的单链区域，其中D'与D互补。

3.根据权利要求1或2中任一项所述的方法，其中步骤c)的变性包括施加至少4pN的拉力。

4.根据权利要求1或2任一项所述的方法，其中步骤c)的变性包括施加至少5pN的拉力。

5.根据权利要求1或2任一项所述的方法，其中步骤c)的变性包括施加至少6pN的拉力。

6.根据权利要求1或2任一项所述的方法，其中多于一种的核酸HP1被附着于至少一个表面。

7.根据权利要求1或2任一项所述的方法，其中使用多种不同的核酸HP2。

8.根据权利要求1或2任一项所述的方法，其中序列A和序列A'各自包含至少30个核苷酸。

9.根据权利要求1或2任一项所述的方法，其中序列A和序列A'各自包含至少35个核苷酸。

10.根据权利要求1或2任一项所述的方法，其中序列A和序列A'各自包含至少40个核苷酸。

11.根据权利要求1或2任一项所述的方法，其中序列A和序列A'各自包含至少45个核苷酸。

12.根据权利要求1或2任一项所述的方法，其中序列C和序列C'各自包含至少10个核苷酸。

13.根据权利要求1或2任一项所述的方法，其中序列C和序列C'各自包含至少12个核苷酸。

14.根据权利要求1或2任一项所述的方法，其中序列C和序列C'各自包含至少13个核苷酸。

15.根据权利要求1或2任一项所述的方法，其中序列C和序列C'各自包含至少14个核苷酸。

16.根据权利要求1或2任一项所述的方法，其中序列C和序列C'各自包含至少15个核苷酸。

17.根据权利要求2所述的方法，其中序列D和序列D'各自包含至少10个核苷酸。