[发明专利]用于检测FVIII抑制剂的新型自动筛选方法的研究

说明书

本文公开了用于确定患者中凝血抑制剂的存在的方法。生成与患者样本相关并具有患者斜率(Ps)的患者曲线和与对照样本相关并具有对照斜率(Cs)的标准曲线，并比较Ps和Cs以获得Ps/Cs平行度比值。Ps/Cs平行度比值小于预定比值表示患者样本中存在凝血抑制剂。

相关申请的交叉引用

本申请要求于2015年5月6日提交的美国临时申请No.62/157,709的权益。

技术领域

本公开总体涉及血液凝固领域，更具体地涉及患者样本中凝血抑制剂的鉴定。

背景技术

通过以下方式确定因子VIII(FVIII)活性：直接测量患者血浆样本的活化部分凝血活酶时间(APTT)，并且通过凝血时间(以秒为单位)的半对数级相对于在几个特定稀释点的标准已知活性百分比绘制标准曲线，由该曲线确定活性百分比。然后将患者血浆与等量的缺乏待测因子的血浆混合以进行稀释，并进行患者样本的因子VIII活性测量，并且由标准曲线计算患者血浆中的因子百分比，其中该标准曲线是通过对于患者样本的特定稀释液而观察到的凝血时间绘制的。在本公开之前，为了最大程度地将少报活性水平或者遗漏抑制剂的存在的可能性降至最低，对患者曲线与标准曲线相比的平行度进行主观评估。在没有抑制剂的情况下，标准曲线和患者曲线彼此平行，患者曲线的斜率(Ps)与标准曲线的斜率(Cs)相似。在具有抑制剂的患者中，凝血时间延长。此外，随着每次随后的稀释，抑制剂的量被稀释，导致随后的稀释液的凝血时间更短。实际上，这使得患者曲线斜率(Ps)小于标准曲线斜率(Cs)，因此它们是非平行线。平行度测定目前是一个主观评估，其导致报告错误增加，并导致潜在的抑制剂评估遗漏和潜在的不必要的抑制剂测试。

发明内容

本文公开了解决本领域的缺点的方法，并且可以提供众多的额外或替代优点，例如提供评价平行度的主观的自动化工具，以作为增加的因子VIII抑制剂存在评价的筛选工具。

本发明的某些实施方案包括确定患者样本中是否存在因子VIII抑制剂的方法。该方法包括以下步骤：生成与患者样本相关并具有患者斜率(Ps)的患者曲线；生成与对照样本相关并具有对照斜率(Cs)的标准曲线，并比较Ps和Cs以获得Ps/Cs平行度比值，其中小于0.45的Ps/Cs平行度比值表明患者样本中存在因子VIII抑制剂。该方法还包括通过绘制患者样本和对照样本的一系列稀释液的凝血时间点与FVIII凝血活性的曲线，从而生成Ps曲线和Cs曲线。利用与凝血检测机进行电子通信的微处理器确定Ps/Cs平行度比值。在某些实施方案中，该方法进一步包括确定Ps/Cs平行度比值小于0.45，并向患者施用用于治疗与因子VIII抑制剂的存在相关的病症的至少一种药剂。在某些实施方案中，该病症是血友病A。在某些实施方案中，该病症是自身免疫性疾病。在某些实施方案中，该药剂是以下药剂中的一种或多种：人因子VIII、猪因子VIII和FVIII旁路剂。在某些实施方案中，该方法还包括由微处理器产生输出，该输出能够由人类用户通过视觉或听觉感知，或者该输出能够为计算机可读的数字信息，其中输出包括指标Ps/Cs比。

本发明的某些实施方案包括确定患者体液中凝血抑制剂的存在的方法。该方法包括以下步骤：通过生成与患者样本相关并且具有患者斜率(Ps)的患者曲线、并生成与对照样本相关并具有对照斜率(Cs)的标准曲线，从而检测患者样本中是否存在凝血抑制剂(CS)。Ps曲线和Cs曲线是通过绘制患者样本和对照样本的一系列稀释液的多个凝血时间点与凝血活性的活性而生成的。该方法包括比较Ps和Cs以获得Ps/Cs平行度比值的步骤，其中Ps/Cs平行度比值小于预定比值表明患者样本中存在凝血抑制剂。在某些实施方案中，预定比值为约0.45。在某些实施方案中，凝血抑制剂是达比加群。在某些实施方案中，凝血抑制剂是因子VIII抑制剂。在某些实施方案中，凝血剂是哺乳动物因子VIII。